QRT-PCR(荧光定量PCR).pptVIP

实时定量PCR (real-time quantitative PCR) 报告人：杨霞 时间：2012-5-11 目录 一、实验原理 二、实验优点 三、实验缺点 四、实验应用 五、实验简介 实时定量PCR (real-time quantitative PCR)是指在PCR指数扩增期间通过连续监测荧光信号强弱的变化来即时测定特异性产物的量，并据此推断目的基因的初始量，不需要取出PCR产物进行分离。 评估基因表达水平等方面的工作,并在不需要构建和筛选cDNA文库的前提下，完成对cDNA片段的克隆 一、实验原理 该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。 在实时荧光定量 PCR 反应中，引入了一种荧光化学物质，随着 PCR 反应的进行， PCR 反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图 ( 如下图) 。 实时荧光扩增曲线图 二、实验优点 原理不同：荧光定量pcr实时监测与DNA结合的荧光染料激发的荧光；普通pcr通过检测插入dna中核酸染料的量来测定pcr最终产物量，一般是紫外光。 反应要求：荧光定量对扩增片段有较高的要求，一般为100-300bp；普通