硕士研究生开题报告.ppt

乳腺癌HER-2的表达与耐药相关机制的研究 广东医学院病理教研室 研究生：龚晓萌 导师：姜汉国 副教授 主要内容 立题依据 研究内容 技术路线 预期结果 研究进度及实验安排 经费预算 立题依据 乳腺癌的现状和耐药性的问题 HER-2的结构与功能 HER-2的表达与乳腺癌及耐药的关系 PI3K的信号传导途径 乳腺癌的现状 近20年来，乳腺癌已经成为严重威胁妇女健康的主要疾病 全球每年发病患者超过100万 耐药性的问题 乳腺癌的治疗主要手段是手术、放疗、 化疗以及内分泌治疗 乳腺癌是对化疗敏感的实体瘤之一,术后辅助化疗可以减少复发率 内在性和获得性的耐药常使化疗失败 多药耐药 多药耐药的概念 多药耐药指肿瘤细胞接触了一种药物之后，不但对该药耐药，而且对其他结构和作用机制不同的药物耐药 多药耐药的主要机制 1、转运蛋白的过表达 2、细胞信号转导通路的异常改变3、抗凋亡机制的参与 HER-2的结构与功能 HER-2原癌基因产物是EGFR家族中的重要成员 HER-2受体由胞内区、胞外区、亲脂性的跨膜区和一段调节性羧基末端组成。 HER-2受体具有酪氨酸激酶活性 HER-2的表达与乳腺癌的关系 HER-2的过表达与肿瘤大小、淋巴结转移、组织学分级、激素受体状态密切相关 HER-2过表达的乳腺癌进展迅速，易转移和复发 HER-2与耐药的关系 乳腺癌的化疗药物大致包括烷化剂、蒽环剂、紫杉剂。紫杉剂是目前应用于临床的一线化疗药物 约50%-70%的肿瘤细胞对紫杉醇存在耐药 在乳腺癌，HER-2的扩增被证实和紫杉醇的耐药有关 YU D等的研究表明，HER-2基因高表达的乳腺癌细胞对Taxol、DDP等化疗药物，全反式维甲酸以及内分泌治疗药物具有很强的耐药性 但是Konecny G等得到了相反的结果，HER-2基因高表达者反而对化疗敏感 PI3K-AKT信号传导途径 郝赛汀（Herceptin）是一种靶向HER-2受体胞外段的单克隆抗体 将郝赛汀应用于阻断生长刺激细胞内信号转导能够降低放、化疗后的细胞修复能力，还可能增加细胞凋亡。 Witters等研究均采用针对HER-2的细胞外区域的抗体处理HER-2的过表达乳腺癌细胞，使这种细胞对三苯氧胺（TAM）及纯雌激素拮抗剂的敏感性增加 可以假设：HER-2通过PI3K-AKT-Bcl-2途径引起细胞的凋亡减少，从而引起细胞耐药性的产生。 用免疫组化的方法检测乳腺癌及癌旁组织HER-2、PI3K、AKT以及Bcl-2的蛋白表达水平 用免疫细胞化学的方法分别检测两种细胞株中的HER-2、PI3K、AKT的蛋白表达水平及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。 用Western-blot方法分别检测两种细胞株中的HER-2以及Bcl-2的蛋白表达水平以及PI3K、AKT的磷酸化的蛋白的水平。 用RT-PCR方法分别检测两种细胞株中的HER-2、PI3K、AKT、Bcl-2的mRNA水平。 流式细胞仪检测两种细胞株的凋亡指数。 技术路线图如下： 检测方法 用免疫组化的方法定性检测HER-2、PI3K、AKT以及Bcl-2的蛋白含量 用Western-blot的方法检测HER-2、Bcl-2以及磷酸化的PI3K、AKT的蛋白含量 预期结果 细胞实验 流式细胞仪检测MCF-7/ADR细胞的凋亡比MCF-7的凋亡少 免疫细胞化学的方法检测HER-2、Bcl-2、PI3K以及AKT的蛋白表达在MCF-7/ADR中比在MCF-7中表达高 Western-blot的方法检测HER-2、Bcl-2以及磷酸化的PI3K以及AKT的蛋白表达在MCF-7/ADR中比在MCF-7中表达高 RT-PCR方法检测HER-2、Bcl-2、PI3K以及AKT的mRNA表达在MCF-7/ADR中比在MCF-7中表达高 研究进度及实验安排 2004. 11-2005.2 完成临床标本的收集 2005. 3-2005.5 完成临床标本的检测 2005. 6-2006.2 完成细胞的复苏培养及细 胞的各项指标的检测 2006. 3-2006.4 撰写论文、准备答辩 经费预算 ◆Western blot： 5000元 ◆免疫组化： 3000元 ◆细胞培养： 2000元 ◆RT-PCR：