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牛奶中几种抗生素检测方法 云月英,王文龙 (内蒙古科技大学生物与化学工程学院,内蒙古包头 014010) 摘 要:文章就牛奶中抗生素残留的几种检测方法做了一个系统综述,介绍了普通方法、色谱法、免 疫法、牛乳发酵活性实验法、Benedict试剂法、DELVOTEST检测法、Deivoteur p试剂等方法。提出,其 中色谱法、免疫法及其联用技术在残留分析方面的研究与应用取得了长足进展,在抗生素残留快速检测 中效果明显。 关键词:牛奶;抗生素;检测 中图分类号:TS207 文献标识码:A 文章编号:1007—6921(2009)02—0077—03 牛奶中抗生素残留问题在世界范围内一直没有 被彻底攻克,已成为行业发展以及食品安全的隐患 之一。抗生素主要指能抑制或杀死其他微生物的一 类化学物质,如青霉素、四环素、金霉素、链霉素、氯 霉素、磺胺类药物等。在医学上,抗生素被广泛的应 用于预防和治疗多种微生物感染性疾病以及某些癌 症。在奶业的源头中,抗生素使用频率很高,特别是 治疗牛乳房炎,常常大剂量反复使用。据统计,约有 十多种抗生素以一种或多种联合的形式采用粉剂、 涂擦剂、注射剂,以及乳导管注入等方式加以应用, 导致抗生素残留相当严重,在奶牛饲料中,也含有抗 生素添加剂。 表1 奶牛乳房炎治疗后牛奶中的抗生素残留[1] 奶区奶房注入药物及每次剂量治疗次数其他治疗方法药物残留天数* 左后青霉素160万IU和链霉素1g 3 6 右前青霉素160万IU和链霉素1g 2 5 左前青霉素160万IU和链霉素1g 3左后一次治疗时,结合静注红霉素150万IU7 右后青霉素160万IU和链霉素1g 1 3 右前青霉素160万IU和链霉素1g 2第一次治疗时,结合 静注四环素5 左后青霉素160万IU和链霉素1g 2 5 右后青霉素160万IU和链霉素1g 1 4 *最后1次治疗后24h开始算起 目前,国内外用于检测奶及奶制品中抗生素残 留的方法很多,而为满足奶及奶制品生产需要和遵 守新法规,人们对快速检测开始感兴趣,而高效液相 色谱法、酶联免疫吸附测定法等方法具有最低检出 限量低、准确性好、灵敏性强、重现性好的特点,成为 残留分析的主流。 1 牛奶中抗生素的弊处 牛奶中不允许残留抗生素,主要有两个原因: 第一,占人口一定比例的人对抗菌素尤其是青 霉素过敏,人们长期饮用或食用抗生素残留的牛奶 或奶制品,也就相当于长期低剂量的摄取抗生素,其 危害性主要有:①使人体产生耐药性,给今后患病使 用抗生素治疗带来不良影响;②抗生素对过敏体质 的人会出现过敏反应,危及健康;③破坏人体内正常 菌群的平衡状态,使菌群失调,甚至造成二重感染, 使重症患者病情难以控制。 第二,发酵奶制品(酸奶和干酪)的生产依赖于 乳酸菌的生长,而乳酸菌的生长受抗菌素的强烈抑 制,常导致发酵失败。 2 普通方法检测牛奶中抗生素[2] 2.1 枯草杆菌纸片检测法 将以吸满受检奶样的滤纸圆片放入一接种枯草 杆菌的琼脂平皿上,并放入一含有标准抗生素的阳 性对照圆片。将陪替氏培养皿在32℃下培养17~ 24h,然后观察有无抑菌圈的出现。如在奶样圆片周 围有明显的抑菌圈,则判定结果为阳性。为确定其结 果是否为真阳性,则须将奶样在82℃下加热2~ 3min,冷却,再重复实验。加热处理旨在消除自然产 生的抑菌性物质的干扰作用,因而可减少假阳性结 果的产生。为了确定阳性物质是否为青霉素(或β- 内酰胺类),对加热后的奶样用青霉素酶处理,以灭 活奶样中的青霉素。然后再进行检测,如原来有抑菌 作用的奶样不再产生抑菌圈,则证明奶中存在青霉 素。如果仍产生抑菌圈,则该抑菌作用是由其他抑菌 化合物所致。如果抑菌圈小,但是尚未完全消失,则 说明存在不止一种抑菌化合物。该筛选方法的检测 限为0.01IU/ml。 2.2 溴甲酚紫比色定性检测法 溴甲酚紫比色定性检测法全称微细菌抑制定性 比色检验法(colormetric bacterial inhibition test)。 此法可用于检测奶中β-内酰胺类抗生素。本试验是 根据嗜热脂肪杆菌的变种calidolactis的快速生长, 以及在其生长过程中同时产生酸的特点而设计的。 ·77· 收稿日期:2008-10-28 内蒙古科技与经济 如果样片中不存在抗菌物质,或抑菌物质的浓度不 足以抑制微生物的生长,则在培养基中会产生酸。如 果样品中的抑菌物质浓度足以抑制细菌的生长,则 在培养基中不会产生酸。酸的产生与否可用溴甲酚 紫染料来指示。该染料在酸性基质中既变为黄色。本 法对β-内酰胺类抗生素特别敏感,但不能用于检测 其他抗生素。在进行样品检测时,需用不含抑菌剂的 牛奶(空白样品)配置一系列青霉素标准溶液,其浓 度分别为0.00