运用高分辨气质联用仪快速检测抗风湿中成药中的西药供参习.docVIP

运用高分辨气质联用仪快速检测抗风湿中成药中的西药 陈老师 （杭州哲博化工科技有限公司哲博检测中心，浙大国家大学科技园，Email：ceshi@） 中成药所含成分复杂、质量标准不完善的缺点, 在中成药生产过程中常添加西药化学药品。西药的含量对药效、毒副作用影响非常大，必须精确测定。准确、快速鉴定中药中外加的西药成分已成为当务之急。以前常用鉴别中药的方法主要有显色法、薄层色谱法( TLC) , 它们都具有一定的局限性,如操作繁琐、可靠性程度不高、经常会有假阳性结果等。随着科技的发展, 气相色谱-质谱联用法已成为分析未知混合物的有效手段之一。本文阐述了采用高分辨、高灵敏度的气质联用仪( GC-TOF-MS) 对抗风湿胶囊进行定性分析, 以发现添加的西药成分, 并对其中成分进行定量分析。 1 实验条件 1. 1 气相色谱-质谱分析条件。色谱柱: DB-5( 30 m×0. 25 mm × 0. 25 um) ; 升温程序: 初始温度50 , 以10 oC min- 1 升至160 , 再以8 oC min- 1升至280 oC ; 恒流进样; 进样量1 mL ;进样口温度260 ; 载气( He) 流速1 mL min- 1 ; 外标法校正仪器; 源温180 oC ; 电离电压70 eV; 质量扫描范围m/ z 20~ 800。 1. 2 高分辨磁式质谱仪分析条件。 EI 源; 源温200 oC; 电子能量70 eV; 加速电压8 kV; 光电倍增管电压650 V; 固体直接进样; 质量扫描范围m/ z 50~ 1 000; 仪器误差小于0. 5 u。1. 2. 3 ?? 液相色谱??质谱分析条件?? Water s Xtterra( 2. 1 × 150 mm, 5 um) 色谱柱, 流动相: V( 0. 1% 甲酸水溶液) ： V ( 甲醇) = 20 ： 80, pH3. 5, 流速0. 2 mL min- 1 ; 正离子方式, 锥电压33 V, 碰撞电压29 V; 定量采用多离子监测技术( MRM) ; 定量监测离子: 291. 0 123. 0 和252. 0 156. 0。 1. 3 抗风湿痛胶囊的提取、分离( 1) 精密称取3 份抗风湿胶囊, 每份约20mg, 分别置于5 mL 刻度离心管中。按照极性由小到大的顺序, 分别用不同溶剂进行超声提取、离心取上清液。 ( 2) 将抗风湿胶囊内容物研成粉末, 并取该粉末适量, 直接进样分析。 2. 抗风湿痛胶囊中外加西药的成分分析 2. 1. 两种不同离子源的结果比较。 将胶囊粉末直接进样, 获得电子轰击( EI) 质谱图, 示于图1。在酸性条件下, 甲醇提取液进样, 获得快原子轰击( FAB) 质谱图, 示于图2。比较两者主要的分子离子峰基本吻合。 2. 2 提取液的分析结果。 通过GC-TOF-MS对不同溶剂提取物进行分析, 结果表明: 在进样口温度290 , 酸性条件下, 甲醇提取液经GC分离得到满意结果; 甲醇提取液GC 分析总离子流结果示于图3a, 图3b~ 3f 分别对应不同保留时间的质谱图。结果表明, 该制剂中含有甲氧苄氨嘧啶、磺胺甲恶唑、安定、可待因、茶碱等5 种西药成分。 通过对不同溶剂的提取物进行GC-TOF-MS 和FAB 谱图的对比, 发现在酸性条件下, 甲醇提取物在FAB 中能够得到理想的结果。但同样的提取物在进行GC-TOF-MS分析时, 与FAB 有很大的差异。这可能有3 个原因: 其一, 升温程序不对, 导致提取物得不到有效地分离。通过改变升温程序和单离子提取, 也得不到相应离子峰, 这说明与升温程序关系不大;其二, 进样口的温度不够高, 达不到被检化合物的汽化温度。通过进样口温度的改变, 发现在保留时间10. 45、11. 24 min 时多出两个不同的峰,通过质谱分析以及谱库检索, 查出保留时间10. 45 min 的峰对应物质为甲氧苄啶, 保留时间11. 24 min 的峰对应物质为磺胺甲噁唑; 其三,在进行不同溶剂提取时, 酸碱的环境不合适也会影响提取效率。通过以上分析, 建立了一整套非法中药制剂的分析方法, 并可利用GC-TOF-MS快速、灵敏地进行分离、鉴定。