biologyexperimnet期中整理-试题及答案1.docVIP

一．Paul Zhou: What unique features in dendritic cells make them the most potent antigen-presenting cells. And how to explore these features in vaccine design and development. 答：⑴ DCs的特点： DCs广泛分布于全身各脏器，成熟DCs形态特殊，细胞膜具有很强的伸缩能力；DCs的细胞表面标志较多，但缺乏特异性的表面标志. 未成熟的DCs具有很强的抗原摄取能力。而成熟的DCs抗原摄取能力下降，处理和提呈抗原的能力提高。 成熟DCs的主要特征：细胞形态不规则，表面有许多膜样或树突样突起；细胞表面具有丰富的有助于抗原提呈的分子；在混合淋巴细胞反应中，既能激活MHC相同的自身反应型T细胞，也能激活MHC不同的同种反应型T细胞；能激活 Naive T细胞增殖并建立初级免疫应答，并具有向局部淋巴细胞T细胞区迁移的能力；DCs激发T细胞增殖及抗原提呈能力是巨噬细胞和B细胞的100-1000倍，也是唯一可以激活静息T细胞的APC。正是以上能力使得DCs成为抗原提呈能力最强的APC ⑵ DCs在疫苗开发中的应用 DCs可以有效递呈来自凋亡细胞的抗原，刺激CTLs成熟，因此可以用于制备抗肿瘤的细胞疫苗、多肽疫苗、以及全肿瘤疫苗。细胞DC疫苗包括凋亡肿瘤细胞致敏的DCs和坏死肿瘤细胞致敏的DCs；多肽DC疫苗则是用已知肿瘤相关抗原肽体外免疫DCs，DC，可诱导相应的特异免疫应答，而且通过修饰某些抗原肽锚位上的单个氨基酸还可以增强该抗原肽与MHC I类分子的亲和力，从而增强其诱导CTL反应的能力；另外，如果利用全肿瘤抗原替代已知抗原疫苗，可以避免鉴定肿瘤特异性抗原的困难，也无需知道患者的MHC类型，还可以降低疫苗的免疫原性。制备全肿瘤型DC疫苗的方法包括有：DC与肿瘤细胞共培养、肿瘤细胞RNA转染DCs、肿瘤-DC融合细胞等等，其中肿瘤-DC融合细胞不但提供DC的抗原呈递功能，还能持续提供内源性肿瘤抗原以进入MHC I呈递途径。 二．FACS 流式细胞术的特点是什么？可应用在哪些领域？流式细胞的图谱如何识别？ 答：FACS的特点： ①测量速度快，最快可在1秒种内计测数万个细胞；②可进行多参数测量，可以对同一个细胞做有关物理、化学特性的多参数测量，并具有明显的统计学意义；③是一门综合性的高科技方法，它综合了激光技术、计算机技术、流体力学、细胞化学、图像技术等从多领域的知识和成果；④既是细胞分析技术，又是精确的分选技术 应用领域包括： ㈠免疫表型分析的应用 1.检测淋巴细胞亚群，监测细胞免疫状态。淋巴细胞是机体免疫系统功能最重要的大细胞群，在免疫应答过程中，末梢血淋巴细胞发育分化成为功能不同的亚群。当亚群的数量和功能发生异常时，就能导致机体免疫紊乱并产生病理变化。FACS可以同时检测一种或几种淋巴细胞表面抗原，将不同的淋巴细胞亚群区分开来，并计算出它们相互间的比例，通过对病人淋巴细胞各亚群数量的测定来监控病人的免疫状态，并指导治疗。 2.白血病/淋巴瘤免疫分型 ； 3.HLA组织配型及HLA与某些疾病的关系； 4.干祖细胞的定量及成分分析； 5.粘附分子;TCR多态性检测;肿瘤癌基因及抑癌基因蛋白产物的检测;细胞内酶;耐药蛋白的分析等等 6.疾病诊断:为疾病诊断提供直接的或支持诊断的依据； 7.免疫调节：细胞因子/受体的相互作用、共刺激分子受体/配体的相互作用； 8.发病机理：肿瘤的发病与机体的免疫力低下、以及信号传递障碍有关； 9.药物/疫苗效果的评价：肿瘤生物治疗的时机选择、以及效果的监测 10.免疫状态评价： 移植、放化疗等。 ㈡DNA含量及细胞周期分析 细胞周期分析:在细胞周期(G0，G1，S，G2 ，M)的各个时期，DNA的含量随各时相呈现出周期性的变化。通过核酸染料标记DNA，并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%，S%及G2/M%。了解细胞的周期分布及细胞的增殖活性。也可利用细胞周期蛋白，对细胞周期进行精确的分期：G0、G1、S、G2、M。应用于肿瘤的早期诊断、肿瘤的良恶性判断、观察细胞的增殖状态及周期分布和疗效监测。 ㈢ 定量分析 1.检测细胞特异性标记物：FCM不但可以定性分析标记物，而且可以进行定量。用标记已知数量的荧光素分子的标准微球作参照，可以计算出每个细胞抗原定簇的个数； ??? 2.CD4绝对计数； ??? 3.CD34绝对计数； ??? 4.可溶性物质(如细胞因子)的高通量定量检测 。 ㈣ 细胞功能分析 1.吞噬功能试验；2.氧爆发试验