核酸适配子的研究.doc

核酸适配子的研究 于东泽 北华大学医学检验学院 08级2班46号 摘要: 核酸适配子是采用指数富集配体的系统进化( SELEX) 技术从随机单链寡核苷酸库中筛选出的能与靶物质高特异性、高亲和力结合的配体。核酸适配体由于具有精确识别、易体外合成与修饰等特点, 它已在基础研究、临床诊断与治疗以及新药研发等诸多领域展示了广阔的应用前景。鉴于其特有的性质, 它们将在环境毒理研究及相关领域, 如环境毒素的快速检测、生物体内毒性评价、毒性阻断研究上有着广阔的应用前景。 关键词：适配子，肿瘤，SELEX 1. .适配子在临床诊断中的应用 适配子感受器在诊断发展方面具有许多优点，其作为生 物组分在诊断应用中提供了许多有利因素，例如未经修饰适配子具有易再生的特点，另外，适配子的易标记性使其在诊断中更具灵活性 。 如今的许多临床诊断技术仍然依赖于免疫学技术如酶联免疫吸附试验。除了这些经典的检测外，可以利用核酸适配子检测蛋白、细胞及分子成像，具有良好的敏感性和特异性。 [1] 2 核酸适配子在疾病治疗中的应用 2．1 抗凝血作用 由于核酸适配子的作用方式是直接结合并抑制已经存在的蛋白的活性，并且具有相对的安全性，价格适中等优点，正成为一种新型抗凝药物。 2．2 抗病毒 特异针对病毒外膜蛋白、整合酶、逆转录酶等的适配子均可用于抗病毒治疗。人类免疫缺陷病毒(HIV)包膜糖蛋自由一个外部糖蛋白(gp120)和跨膜域(go41)组成，并在病毒进 入到细胞中的重要作用。 2．3 抗增殖作用 血管生成在肿瘤侵袭、转移过程中发挥作用。血管内皮生长因子(vflsCtlar endothelial growth fac．tor，Ⅶ GF)是血管生成的重要调节因子，在大多数实体瘤和某些病理情况下升高。[2] 3核酸适配子在肿瘤学研究中的应用 3.1细胞因子及其受体血管内皮生长因子(vascular endothelial growth{actor，VEGF)是肿瘤血管生成的重要调节因子，在肿瘤的发生、发展和转移中起重要作用。 3.2肿瘤标志 肿瘤标志是肿瘤组织特异表达的一种蛋白质，只在肿瘤细胞或胚胎发育早期某些组织表达，正常组织不表达或很少表达。 3.3转录起始调控 哺乳动物的转录起始是一个非常复杂和需要高度精确调控的过程，它包含了许多转录起始因子的相互作用，精确的控制转录起始对细胞的生长极为重要。[3] 4.核酸适配子在肿瘤诊断中的应用 核酸适配子可用于体内肿瘤的分子成像，也可通过三明治夹心法 J、生物芯片 J、生物传感器 、分子信标_7 术对靶物质进行检测，有良好的敏感性和特异性，显示出良好的应用前景。[6] 5配体指数级富集系统进化技术(SELEX) 配体指数级富集系统进化技术( systematic evolution ofligands by exponential enrichment, SELEX) 是一种组合化学技术,它可从大容量的寡核苷酸库中筛选出对靶分子结合具有高特异性和高结合性的核酸适配子( aptamer, 又称适配体) SELEX 技术的原理及特点 SELEX 技术的基本思路是体外化学合成一个单链寡核苷酸库, 与靶物质混合, 形成靶物质-核酸的复合物, 洗脱未结合的核酸, 分离与靶物质结合的核酸分子, 并以此核酸分子为模板进行PCR 扩增, 再进入下轮的筛选过程。[4] 6.SELEX技术的运用 抗体技术提供了对各种各样分子识别的需要，为临床检测和治疗提供了物质基础，并且成为目前临床检验不可缺少的部分。随着SELEX技术的出现，提供了能识别各种各样靶物质并对相应靶物质具有高亲和力和特异性寡核苷酸适配子的可能性。这些称之为“适配子”的寡核苷酸片段，开始在治疗与检测方面与抗体竞争。适配子不同于抗体，为小分子核 苷酸片段，但它们在各种各样的检测形式上类似于抗体特性，对协助现有的和正在出现的疾病检测分析，可满足分子识别的需要，因此，具有巨大的潜在使用价值。[5] 7.SELEX技术的基本流程 SEIEX技术的基本思想是体外化学合成一个单链寡核苷酸库，用它与靶物质混合，混台液中存在靶物质：核酸的复合物，洗掉未与靶物质结合的核酸，分离与靶物质结合的核酸分子，以此核酸分子为模板进行PCR扩增，再进行下一轮的筛选过程。通过重复的筛选与扩增，一些与靶物质不结合或与靶物质有低亲和力、中亲和力的DNA或RNA分子被洗去，称之为“适配子”(aptamer)即与靶物质高有亲和力的DNA分子或RNA 分子从非常大的随机库中分离出来，且纯度随SEI EX过程的进行而增高，从P摩尔到n摩尔，有的甚至到 摩尔，最后占据库的大多数(90 左右) [7] 8.影响SELEX过程的因素 影响筛选结果的主要因数是每种靶物质适配