血液及骨髓标本的细菌学检验.docVIP

血液及骨髓标本的细菌学检验 一、标本采集 （一） 操作方法 1．将患者拟采血部位放平，扎以止血带，选好静脉穿刺点，以皮点为中心用2．5 ％～3 ％碘酊从内向外周擦拭，待干后再以同法用75 ％乙醇脱碘。消毒范围不得过小。 2．以无菌手续由静脉取血5 ml ，立即注入适当的液体增菌培养基内， 迅速轻摇，使充分混合，以防止凝固。 （二） 注意事项 1．血液标本应在病人发热1 ～2 天内或发热高峰采集培养为宜，此时阳性率较高。 2．培养基与血液的比例为10∶1 。 3．培养一般细菌用普通肉汤或酚红葡萄糖肉汤，培养对营养要求较高的细菌用肝浸液或胰胨肉汤等。 4．采血和接种时应严格注意无菌操作，避免污染杂菌。 5．磺胺和抗生素可影响细菌检出的结果。故在采集标本时应力争在抗菌药物治疗之前。如果病人曾服用磺胺类药物，应在每100 ml 培养基内加对氨苯甲酸5 mg ， 以防止磺胺类药物对细菌的抑制作用。如果病人已用青霉素治疗，应在培养基中加入青霉素酶100 U／50 ml （青霉素酶不耐热，应在临用时加入）。若病人已用其他抗生素治疗时，可用硫酸镁肉汤增菌。 6．标本的采取应以提高阳性检出率为目的。 二、检验程序 血液标本的细菌学检验程序见下图。 ? 三、检验方法及报告方式 （一） 一般细菌的检验 1．标本接种于肉汤培养基后，立即置35 ±1 ℃温箱内孵育，每天取出一次观察有无细菌生长，应特别注意观察肉汤内有无混浊、沉淀、菌膜、色素、血液变色、指示剂变色等现象，并记录之。如有细菌生长，肉汤可呈现各种不同的生长现象，若发生混浊，大多可疑为革兰阴性杆菌；若均匀混浊有绿色荧光，则可疑为绿脓杆菌；上面澄清，下面有沉淀，可疑为链球菌；若见自下而上的溶血现象，可疑为溶血性链球菌；若呈现肉冻样凝固现象，疑为葡萄球菌；若表面有灰白菌膜，疑为枯草杆菌或类白喉杆菌。 2．当疑有细菌生长时，应以无菌操作挑取培养物涂片进行革兰染色镜检。一旦见有细菌生长，并能排除污染，应及时转种于血平板或其他培养基进行药物敏感试验或分离培养。根据菌落特征及菌体染色镜检形态，可得出初步印象，并需继续培养，按各种属细菌加以鉴定。报告：“有X X X 菌生长”。 3．如不见细菌生长，应继续培养至第7 天，取出后接种于血平板，经培养仍无细菌生长时，可报告为：“经7 天培养无细菌生长。” 对于亚急性心内膜炎病人标本，应培养一个月，才能作出结论。 （二）布氏杆菌的检验 将可疑为布氏杆菌的血液标本接种于肝浸液2 支，分别置于10 ％二氧化碳环境中及普通环境中35 ±1 ℃ 培养，每天观察一次，每隔5 天移种一次血平板。培养1 周后，若肝浸液有此菌生长时，出现肉眼可见的轻度混浊，久之可出现菌膜并有粘稠性沉淀物。此时应作涂片染色镜检，并立即移种于2 份肝浸液平板或血平板，分别置于10 ％二氧化碳及普通环境下培养。如菌落及涂片染色镜检形态典型，再作布氏杆菌血清凝集试验，如为阳性，可报告为：“培养出布氏杆菌”。必要时，可将分离的菌株进一步鉴定及分型。若培养3 ～4 周后仍无细菌生长者，则可报告：“经X 周培养无细菌生长。” （三）脑膜炎奈瑟菌培养 首先将胰胨肉汤或含2g／L 葡萄糖的肝浸液（或肉浸液） 预温至35 ℃，然后再将病人的血液标本注入培养基瓶中，摇匀后培养于10 ％ 二氧化碳环境中， 每天观察一次。如疑有细菌生长，再移种于经35 ℃预温的巧克力色血平板或血平板进行划线分离，然后于35 ±1 ℃、5 ％～10 ％二氧化碳环境中培养18 ～48 小时， 如发现平板上有光滑、湿润、透明、粘性的菌落且中等大小，经革兰染色为阴性双球菌者， 可做出初步报告：“有脑膜炎奈瑟菌生长。” 同时挑取菌落接种于预温的巧克力色或血平板同上法行纯培养。经涂片染色镜检确定后，作糖发酵、氧化酶、自凝现象，血清玻片凝集等试验，以与其他奈瑟菌区别。如各项检查均符合此菌者，必要时再用分群血清作玻片凝集进行分群作出最后鉴定。 （四） 伤寒沙门菌及其它沙门菌培养 将病人的血液接种于葡萄糖胆汁肉汤或胆盐肉汤中，经增菌培养后，如疑有细菌生长，再移种到选择性平板（如SS 琼脂平板，中国蓝平板等） 上作划线分离， 置35 ±1 ℃培养16 ～24 小时后，挑取可疑菌落接种于双糖或三糖铁高层斜面培养基， 观察其生化反应。根据生化反应，可初步区别细菌类属。再与多价诊断血清作凝集试验，即可作出初检报告。必要时，用纯培养物进一步作生化反应和选用适当的因子血清作凝集试验，加以鉴定，即可确诊。若无细菌生长，培养至第7 天即可报告：“培养7 天无细菌生长”。 （五） 厌氧菌培养 将血液标本接种于肝浸汤培养基中，然后置厌氧环境中培养。如有细菌生长，移种两个血平板或K V A 血平板（或LK V 、苯乙醇血平板） 上，分别作厌氧培养和普通培养，经35 ±1