16细胞粘附分子测定及应用.pptVIP

白细胞分化抗原和细胞粘附分子测定 第一节 白细胞分化抗原一、白细胞分化抗原的概念 白细胞分化抗原是指血细胞在分化成熟为不同谱系（lineage）、分化的不同阶段及细胞活化过程中，出现或消失的细胞表面标记分子。 CD分子概念 CD （cluster of differentiation），分化群。将来自不同实验室的单克隆抗体所识别的同一分化抗原归为一个分化群，每一CD分子代表一种或一类分化抗原。人CD的编号已从CD1命名至CD247，可大致划分为T细胞、B细胞、髓系细胞、NK细胞、血小板、粘附分子、内皮细胞、细胞因子受体和非谱系等九个组。 白细胞分化抗原的分类 根据人白细胞分化抗原胞膜外区结构特点,可分为不同的家族（family）或超家族（superfamily），常见的有： 免疫球蛋白超家族（immunoglobulin superfamily，IgSF）、 细胞因子受体家族（cytokine receptor family）、 C型凝集素超家族、 整合素家族（integrin family）、 肿瘤坏死因子超家族（tumor necrosis factor superfamily，TNFSF）、 肿瘤坏死因子受体超家族（TNFRSF）等。 二，白细胞分化抗原测定 （4）流式细胞术 流式细胞术是以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或颗粒，测量其产生的散射光和发射荧光的强度，从而对细胞（或微粒）进行定性或定量检测的一种细胞分析技术。由于流式细胞术可同时鉴别单个细胞上的多种抗原，而且在极短时间内分析大量细胞，因此在医学基础研究和临床疾病的诊断、治疗及发病机制研究中得到了广泛应用。 特点 1,各种组织细胞均可用于分析,如血液、骨髓、体液中的细胞、培养细胞等，实体组织经处理后制成单细胞悬液均能分析。 2,测量速度快，每分钟能测量数千至数万个细胞。 3,可进行多参数的分析, 可同时检测四种不同荧光染色的细胞。新一代的流式细胞仪可同时检测三十二色的细胞。 4,可将目的细胞无菌分选出来做进一步的培养。 三，白细胞分化抗原测定的应用（一）在免疫学中的应用 淋巴细胞免疫表型分析 根据淋巴细胞的功能及膜表面标记，主要分为T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞三个亚群，但三者在普通光学显微镜下不能区分，血细胞分析仪也无法鉴别，只有用流式细胞仪结合单克隆抗体技术才能准确分类计数淋巴细胞亚群。 经常测定的淋巴细胞免疫标记包括： T淋巴细胞?：CD3、CD4、CD8,? T?辅助细胞?：CD3+CD4+,? T?抑制细胞：CD3+CD8+, B?淋巴细胞：CD19、或CD20， NK?细胞?：CD56、CD16， 活化细胞：CD25、HLA-DR、 CD40L、CD71。 流式检测人外周血淋巴细胞亚群的正常参考范围 CD3+????????????? 70.0±12.0%????CD3+CD4+CD8- 40.0±9.0%???? CD3+CD4-CD8+??? ?30.0±8.0% CD3-CD56+(NK)? ???12.0±8.0% CD19+ 8.0±3.0% CD4+/ CD8+比值： 1.0 - 2.5 1，原发性免疫缺陷病：T淋巴细胞缺乏，或B淋巴细胞缺乏或减少。 2，HIV感染与AIDS：CD4+淋巴细胞的百分比和数量减低。 3，SARS： T淋巴细胞（CD3+细胞）绝对数减少最为显著。 4，自身免疫性疾病：系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等自身免疫疾病患者CD4+/CD8+细胞比值异常。 5，造血干细胞移植后免疫重建：NK细胞首先开始升高，随后T淋巴细胞和B淋巴细胞开始恢复，CD4+/CD8+细胞比值约在第二年才能逆转（1）。 6，移植后免疫监测：动态监测血液CD2+、CD3+、CD25+表达的变化，当其持续增高时提示发生移植排斥反应； CD4+/CD8+细胞比值持续减低表示移植后感染，若比值0.2时应停用免疫抑制剂，以免继发严重感染而导致移植失败。 7，实体肿瘤疗效观察：恶性肿瘤患者治疗前CD3+细胞数量、CD4+/CD8+细胞比值常减低，化疗或放疗有效时则可逐渐恢复或达到正常水平。淋巴细胞免疫表型正常或治疗后能恢复正常者预后常较好。 （二）在血液学中的应用：概念：白细胞分化抗原(LDA,CD) CD (cluster of differentiation)指的是分化群或分化簇。在使用CD命名细胞膜表面免疫标志的初期，指白细胞膜上的抗原，故又称白细胞分化抗原。 目前“CD”代表的不仅仅是白细胞表面抗原，还有红细胞膜表面抗原、血小