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泌尿外科组织工程技术的研究现状和展望 作者：杨嗣星 作者单位：(武汉大学人民医院泌尿外科，武汉 430060)关键词：组织工程；泌尿外科；微创修复 【关键词】 泌尿外科 　 泌尿外科组织工程技术为泌尿道的组织、器官的微创修复和功能重建带来了新的希望。近年来,有关泌尿系组织工程的种子细胞和支架材料的研究以及组织工程化组织如肾脏、输尿管、膀胱、尿道、阴茎海绵体等的实验和临床研究报道层出不穷。其基本方法是应用细胞生物学和工程学的原理，将体外培养扩增后具有生物学活力及特定功能的细胞(种子细胞)与可降解生物支架材料复合，然后将该细胞支架复合物( 组织工程化组织)植入体内组织缺损部位，细胞在支架降解吸收的过程中分泌新的细胞外基质，形成具有正常形态和功能的组织，用以修复或改善损伤组织或器官的结构与功能,达到真正意义上的生物学重建[1]。最近，Atala报道采用组织工程化膀胱成功修复7例脊髓膜膨出患者的神经原性膀胱的临床研究更为泌尿外科组织工程技术从基础研究向临床应用迎来了曙光[2]。本文就泌尿外科组织工程技术中种子细胞、支架材料、组织构建以及临床应用等方面作一介绍。 1 种子细胞的研究 尿路组织工程的种子细胞主要有尿路上皮细胞和平滑肌细胞，源于这两类细胞能在体外培养扩增。理论上1cm×1cm的尿路上皮细胞在8周内可培养扩增到4202m2，足够进行泌尿系各种组织的修复替代[3]。Fossum等[4]收集患者膀胱冲洗液提取膀胱上皮细胞用于体外培养扩增，仍能形成正常形态的角化上皮层，从而开创了一种无创获取种子细胞的新途径。Lai等[5]获取患神经原性膀胱或膀胱外翻患者的膀胱后，将培养扩增的平滑肌细胞种植于聚乳酸和聚羟基乙酸共聚物(PLGA)上，免疫组化研究显示Α肌动蛋白和肌球蛋白阳性，且在电刺激和拟胆碱药物作用下，出现明显的收缩舒张反应，说明其形态和功能特征与正常平滑肌细胞并无明显差异。这就进一步扩大了种子细胞的来源，也为临床应用奠定了基础。2006年Atala[2]首次报道了采用自体膀胱尿路上皮细胞和平滑肌细胞作为种子细胞构建组织工程化膀胱行膀胱扩大的临床研究，其种子细胞是通过耻骨上切开获取1-2cm2神经原性膀胱组织，行体外分离培养，培养6周后，细胞数量可达到7×108，可用于修复膀胱组织70-150cm2。 然而，以上获取种子细胞的方法对泌尿系肿瘤患者并不适用。而采用具有自我更新和无限增殖能力的多能干细胞或成体干细胞诱导分化为种子细胞逐渐成为研究热点[6]。Rodriguez等[7]报道采用人脂肪源干细胞在一定条件下能诱导分化为结构功能正常的平滑肌细胞，诱导分化的平滑肌细胞表达膀胱平滑肌细胞的所有表面标志，包括平滑肌特异性Α肌动蛋白、钙结合蛋白和重链肌球蛋白等，并且具有收缩舒张功能。Ottamasathien[8]最近研究表明胚胎干细胞能直接诱导分化为具有收缩舒张功能的平滑肌细胞。而采用干细胞体外诱导分化为尿路上皮细胞的研究尚未见报道。傅强等[9]分离培养兔包皮的表皮细胞作为种子细胞，种植于尿道无细胞基质上修复管状尿道缺损1.5cm，认为包皮表皮细胞能替代尿路上皮细胞修复尿道缺损。另外，Frimberger 等[10]采用人胚胎干细胞种植于猪小肠黏膜下层修复大鼠膀胱缺损，与单纯小肠黏膜下层修复比较，种植人胚胎干细胞的小肠黏膜下层能明显促进膀胱组织再生。进一步研究表明人胚胎干细胞具有趋化效益，能加快尿路上皮细胞和平滑肌细胞在支架上的爬行，加快膀胱组织再生[11]。 2 支架材料的研究 理想的支架材料应具有以下几点：①良好的组织相容性，无免疫原性，不发生排斥反应；②具有三维主体结构，以提供细胞黏附和生长的空间；③无毒性，适当的降解速率，降解产物应可吸收；④易塑型，有一定的强度对抗外力，并能调节细胞黏附、增殖、迁移和分化[12]。应用于泌尿系组织工程的生物支架分三大类：天然细胞外基质(ECM)如胶原、蛋白多糖、糖蛋白、网状纤维等；ECM衍生物如膀胱细胞外基质(BECM)、尿道细胞外基质(UECM)、小肠黏膜下层(SIS)等；合成聚合物如聚羟基乙酸(PGA)、聚乳酸(PLA)及两者的共聚物(PLGA)。上述三类材料的生物相容性，已通过这些材料与人尿路上皮细胞和平滑肌细胞共同培养所测试[13]。各种材料有各自的优缺点。高分子聚合材料能大规模生产，其机械性能、降解时间和微细结构可以很好地调控，但其生物相容性差。生物衍生材料是通过机械、化学方法除去组织中的细胞成分仅保留无细胞的细胞外基质，具有良好的组织相容性，可用于同种异体甚至异种移植，并不发生排斥反应。而且这类材料具有最接近人体的网架结构、生物力学性能、部分活性因