蛋白质层析分离纯化技术概要.pptVIP

准备 HiTrap? Chelating 柱 冲洗 5 ml H2O 加 0.5 ml 0.5 M NiSO4 冲洗 5 ml H2O 用 5-10 ml 20 mM Tris? -HCl, 5 mM 咪唑, 6 M 盐酸胍,1 mM 2-巯基乙醇pH 8 结合缓冲液洗柱 最多 5 分钟 * 纯化和复性 稀释样品, 用 10 ml 结合缓冲液洗柱，5 mM 咪唑, 6 M 盐酸胍, pH 8.0上样，并以 20 mM咪唑, 6 M 尿素 pH 8.0 缓冲液洗柱 复性 线性梯度：~ 6 to 0 M 尿素  最少 30 柱体积 流速： 0.1 ml/min - 1 ml/min 用没有尿素缓冲液冲洗 5 个柱体积 纯化和洗脱 线性梯度: 20 mM - 500 mM 咪唑 10 - 20柱体积 用 HiTrap Desalting 交换缓冲液去除咪唑 1.0 0.75 0.5 0.25 0 10 20 30 40 50 60 65 ml Manually using a syringe: ? Sample loading ? Gua-HCl wash ? Urea wash Start elution fr. 38 fr. 42 fr. 46 fr. 49 fr. 40 Start refold- ing A 280 * 组份