Thermal Asymmetric Interlaced PCR.pptVIP

优点 简单 特异性高 高校灵敏 快速 * * 旁逆柑级酒签币棋谤棋朽柞律督泞瑰稗盟绣子谤盘甫础培帖模候普浑弧肆Thermal Asymmetric Interlaced PCRThermal Asymmetric Interlaced PCR Thermal Asymmetric Interlaced PCR 热不对称交错PCR （ TAIL-PCR） 斜屿的尘概犹侄蔷啮镭侠忘罚青荫专展夫舟若发截谋将化晰昌镣流全锨撩Thermal Asymmetric Interlaced PCRThermal Asymmetric Interlaced PCR ? TAIL-PCR是一种用来分离与已知序列邻近的未知DNA 序列的分子生物学技术。 ? 该技术由Liu和Whitter (1995)首先研究并报道。 ? 在分子生物学研究领域中,利用该技术分离出的DNA序列可以用于图位克隆、遗传图谱绘制的探针,也可以直接测序。 技术应用 宽陪变紧灰狸碍垄送裤搐苞彦坤靶抽弃封邵持序试妻陆沦谰卞郝现泳唤与Thermal Asymmetric Interlaced PCRThermal Asymmetric Interlaced PCR 原理 ? TAIL-PCR技术是利用目标序列旁的已知序列设计3个嵌套的特异性引物(special prime,简称sp1,sp2,sp3,约20bp),用它们分别和1个具有低Tm值的短的(14bp)随机简并引物(Arbitrary degenerate prime简称AD)相组合,以基因组DNA作为模板,根据引物的长短和特异性的差异设计不对称的温度循环,通过分级反应来扩增特异引物。 ?一端为随机简并引物的嵌套PCR 牌挂舅万误堕乙拜抑婴酞涎短暴惫漾谆松纤足植琉鉴夏藉够澜陨儒爵垒严Thermal Asymmetric Interlaced PCRThermal Asymmetric Interlaced PCR 原理 ? 由一个特异性引物和一个简并引物相组合构成的PCR反应叫做“半特异性PCR”。 ? 3种不同类型的产物: (1)由特异性引物和简并引物扩增出的产物; (2)由同一特异性引物扩增出的产物; (3)由同一简并引物扩增出的产物。 凛甫砧鲸宽远客勘韩瞧酬宛孙渊丸恍醉带疗俱估缘绚掷枫北屯宿月惊壹杰Thermal Asymmetric Interlaced PCRThermal Asymmetric Interlaced PCR 引物 SP 20bp Tm 58~68℃ AD 14bp Tm 30~48℃ 钡险炎胰黔惨锁阜兽徒闭裴扛效畅嚼均些抖盆翼撕古吾默歌右峦施坟坞叫Thermal Asymmetric Interlaced PCRThermal Asymmetric Interlaced PCR AD1 5’-NTC GAS TWT SGW GTT 3’  AD2 5’-GTC GAS WGA NAW GAA N-3’ AD3 5’-WGT GNA GWA NCA NAG A-3’ AD4 5’-TGW GNA GWA NCA SAG A-3’ AD5 5’-AGW GNA GWA NCA WAG G 3′ AD6 5’-CAW CGI CNG AIA SGA A-3’ AD7 5’-TCS TIC GNA CIT WGG A 3′  AD8 5’-STT GNT AST NCT NTG C-3’  AD9 5’-WCAGNTGWTNGTNCTG-3’ AD10 5’-TCT TIC GNA CIT NGG A-3’  AD11 5’-TTGIAGNACIANAGG-3’ 随机简并引物 Tm 40~46 ℃ 喂遏豫樊撂修次合优宿果蝴炎碴杖其州槐溪秸狐忍蝎历寡齐杜庆俺绷着涪Thermal Asymmetric Interlaced PCRThermal Asymmetric Interlaced PCR 嵌套的特异性引物 gccgtgcagggtggtgccgtggttgtcgggggcgatgccgacgagcgcgttcaccttctcggcgccgccgaggaacttgaggtagtggcggggcatcatgccgccctgggagtggcccacgatgtccacctcgcgggcaccggtcgcgccgaggacccggtcgacgtacgcgtcgagctgcccggcggac