考马斯亮蓝法测蛋白质含量.pptVIP

实验四：考马斯亮蓝法测定 蛋白质含量 制作: 医学与生命科学学院生技二班 一、实验目的。 ⒈掌握考马斯亮蓝法定量测定蛋白质的原理与方法。 ⒉熟练分光光度计的使用和操作方法。 双缩脲法和Folin—酚试剂法的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的 蛋白质溶液测定的方法。 1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法（Bradford法），是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。 二、实验原理 ★考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置，由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕红色变为蓝色。经研究认为，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。 ★在595nm下测定的吸光度值，与蛋白质浓度成正比 ★实验优点 （1）灵敏度高。据估计比Lowry法约高四倍，蛋白质－染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。 （2）测定快速、简便，只需加一种试剂。完成一个样品的测定，只需要5分钟左右。由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要2分钟即可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性最好。因而完全不