7章 DNA 重组与转座讲义.pptVIP

Ac和Ds这两个因子都位于玉米第9号染色体短臂，在色素基因C的附近。当C基因附近有Ac而没有Ds时，C基因处于活化状态，玉米籽粒内有色素生成，籽粒是有颜色的。当D．s因子插入基因C并且Ac也存在的情况下，虽然Ds抑制基因C的活性，但由于在玉米胚乳发育期间有些细胞里的Ds因Ac存在而切离转座，所以这些细胞仍能合成色素，因而玉米籽粒出现色素斑点。当Ac不存在时，Ds固定在C基因处，C不再合成色素。玉米籽粒就没有颜色。 Ac和Ds这两个因子都位于玉米的第九号染色体短臂，在色素基因C的附近。 Ac因子全长4.5kb，有5个外显子，其产物是转座酶。Ac因子两端是长11bp的反向重复序列(IR)； Ds因子长0.4-4kb，它的中间(在转座酶基因中)有许多种长度不等的缺失, 如Ds9只缺失194bp，而Ds6则缺失2.5kb，Ds的两端也都有11bp的反向重复序列。 Ac和Ds的末端反向重复几乎是一样的，只有一个不同之处：Ac两端最外边的核苷酸是彼此不互补的T:G，而Ds是互补的T:A(图)。 　Ac-Ds转座元件结构示意图。右边示Ac及Ds元件的单链DNA末端反向重复配对所形成的茎环结构，这种结构可能对转座有意义 由于缺失转座酶，Ds因子不能自主移动，因此Ds因子是非自主移动的受体因子(dissociator)，而Ac则为自主移动的调节因子(activator )，Ds的转座依赖于Ac元件的存在。 Ac、Ds的转座属于非复制机制，即不是复制一份拷贝后将拷贝转移，而是直接从原来位置消失。 玉米转座因子对胚乳颜色的影响 2 果蝇中的P元件 果蝇的品系P型和M型杂交时，会出现： P雄 + M雌 后代不育 P雌 + M雄 后代可育? P品系中有P元件，M品系中无。P元件长度可变，最长约2.5 Kb，其中有4个ORF框。 P元件的两侧31bp反向重复序列，在靶位点上形成8bp的正向重复。 体细胞，P元件仅前两个内含子1、2被剪切，产生的mRNA为ORF0-ORF1-ORF2，编码转座酶抑制物（ 66KD ）。 卵细胞中，可正常切除3个内含子，将4个外显子联在一起，产生有活性的转座酶（ 87KD ），使P元件转座，产生的配子细胞不育。? P品系的雌果蝇产生的卵细胞中有细胞质，其中早已充满体细胞产生的转座酶阻遏物，与任何品系的雄果蝇杂交，抑制雄性配子P元件编码转座酶的活性，后代全都可育。 M品系雌果蝇中，由于卵细胞中无完整的P元件，也就没有转座酶的抑制物，与P品系的雄果蝇杂交时，P元件不受抑制表达出转座酶而转座，产生的配子不育，后代不育。 三、真核生物中的逆转座子 逆转录转座：从DNA-RNA-DNA的转移过程（转录、逆转录） 逆转座子（retroposon，retrotransposon）：以RNA为中间体，经逆转录过程再分散到基因组中的移动元件。自己编码逆转录酶和整合酶 结构：2类 （1）有长末端重复序列（long terminal repeat, LTR），含有gag、pol基因 （2）无LTR，3`端有polyA，编码区含gag、pol类似序列，5`端常被截短。 FSH-β基因内含子1插入片段的序列分析 Region A of RNA polymerase Ⅲ promoter 　　　 1 GAAACGTTTGGAGTTCCCGTCGTGGCGCAGTGGTTAACGAATCCGACTAGGAACCATGAGGTTGC Region B of RNA polymerase Ⅲ promoter AluⅠ 66 GGGTTCGGTCCCTGCCCTTGCTCAGTGGGTTAatgatccggcgttgccgtgagctgtggtgtagg M I R R C R E L W C R AluⅠ 　 131 tcgcagacgcggctcagatccctcgttgctgtggctctggcgtagGCGGGTGGCTACAGCTCTGA S Q T R L R S L V A V A L A