牛乳中产耐高温蛋白酶嗜冷菌的分离.docVIP

牛乳中产耐高温蛋白酶嗜冷菌的分离及鉴定研究 刘　敏　　　 曹志军　　　　　 李艳梅 （内蒙古农业大学职业技术学院　014109） 摘要：本文采用单一性底物平板分离法和Folin法，观察其水解圈大小和测酶活力，从牛乳中共获得10株产耐高温蛋白酶的嗜冷菌。对其菌体形态、染色反应、培养性状、生理生化性状进行了系统研究, 鉴定结果表明,上述10个细菌菌株分别属于气单胞菌属（Aeromonas）、巴斯德氏菌属（Pasteurella）、黄杆菌属(Flavobacterium)、变形菌属（Proteus）、节杆菌属（Arthrobacter）、短杆菌属（Brevibacterium）、微球菌属（Micrococcus）、片球菌属（Pediococcus）、乳球菌属（Lactococcus）和明串球菌属（Trichococcus）。 关键词: 嗜冷菌; 耐高温蛋白酶; 分离; 鉴定 Studies on Isolating of Identification of Psychrophilies Producing Thermotolerant Protease in Milk 　　　　　　　　 　Liu min Caozhijun　　 Liyanmei （Vocational and technical college of inner Mongolia agricultural university 014109） Abstract:Ten strains of Psychrophilies that producing heatproof protin enzymes were screened out by prate separation and folin methods. Meanwhile, it can also observe their proteclytic circle and proteclytic activity to obtain them.,and were idendified. as Aeromonas, Pasteurella, Flavobacterium, Proteus, Arthrobacter, Brevibacterium, Micrococcus, Pediococcus, Lactococcus and Trichococcus based on bacterial modality,deying reaction, cultural characteristics, physiological characteristics and biochemical reactions. Key words: Psychrophilies; Heatproof protin enzyme; Isolation; Identification 在低温条件下贮藏原料乳，会有嗜冷菌选择性的生长[1]。通常鲜乳中的嗜冷菌主要是由于榨乳用具不清洁和杀菌不彻底而污染所致，它在最初的细菌总数中占10％～50％，在随后的冷藏过程中很快成为优势菌株，进行生长繁殖和代谢活动从而引起冷藏乳的变质。并且大多数嗜冷菌在低温贮藏时产生耐热性的胞外蛋白酶，这些酶类耐受高温处理，无法通过单一的加热方法将其灭活，使乳制品产生凝胶、沉淀、苦味、酸败等不良现象的同时影响产品的色泽。导致乳及乳制品风味和质地的变异，缩短保质期，从而影响产品的质量及加工过程的顺利进行。 目前，引起鲜乳变质的嗜冷菌2-3mL，带回实验室置4℃冰箱备用。 1.1.2　培养基 LA培养基、NB培养基、PDA培养基、金氏培养基B(K′B培养基)[5]。 1.1.3标准菌株 门多萨假单胞菌（Pseudomonas mendocina）A．S1086购于中科院菌种保藏中心； 1.2方法 1.2.1产蛋白酶菌株分离方法：采用水解圈法初筛，应用管碟法和Folin试剂显色法进行复筛。 1.2.2产酶菌株的鉴定：选取产酶菌株10株,将分离纯化的10个菌株在LA培养基上培养24h后,进行培养性状和生理生化测定,并按照格兰氏染色法和3%KOH简易法[6],测定其染色反应;按照油镜观察和磷钨酸负染法电镜观察其菌体形态;同时将10个细菌菌株在0、5、10、15、20、25℃等6个不同的温度,5.5、6、6.5、7、7.5、8等6个不同氢离子浓度(pH值)和0.5%、3%、5%、7%、10%、15%等6个不同NaCl浓度条件下,接种培养不同时间,测定其生长情况。根据菌体形态、电镜观察、染色反应、培养性状和生理生化测定,并按《伯杰氏细菌鉴定手册》第八版等其他文献进行鉴定[7-10]。 2结果 2.1蛋白酶产生菌的筛选