第二章吸光光度法.ppt.ppt

2.1 光谱分析法概述 2.2 吸光光度法基本原理 2.3 目视比色法与可见分光光度法 2.4 显色反应及显色条件的选择 2.5 吸光度测量条件的选择 2.6 分光光度法的应用 2.2 吸光光度法基本原理 一、物质对光的选择性吸收 二、可见光分光光度法 2.4 显色反应及显色条件的选择 一、显色反应的选择 2.5 吸光度测量条件的选择 2.6 分光光度法的应用 （5）εmax越大表明该物质的吸光能力越强，用光度法测定该物质的灵敏度越高。 ε 105：超高灵敏； ε= (6～10）×104 ：高灵敏； ε 2×104 ：不灵敏。 （6）ε在数值上等于浓度为1mol/L、液层厚度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度。 　　7.吸光度A的加和性 　　 则总浓度等于各个组分吸光度之和： 　　　A=A1+A2+..........+An 溶液中有几种吸光物质，彼此间不发生化学反应，则可： 三、标准曲线 A ＝ －lg T = εb c 标准曲线：A-C（吸光度-浓度）曲线，又称校准曲线或工作曲线 0 1 2 3 4 C/mol·L-1 A 。 。 。 。 * 0.8 0.6 0.4 0.2 0 故由曲线的斜率即可求出ε 四.偏离朗伯—比耳定律的原因 标准曲线法测定未知溶液的浓度时，发现：标准曲线常发生弯曲（尤其当溶液浓度较高时），这种现象称为对朗伯—比耳定律的偏离。 引起这种偏离的因素（两大类）： （1）物理性因素，即仪器的非理想引起的； （2）化学性因素。 （1）物理性因素 难以获得真正平行的纯单色光。朗—比耳定律的前提条件之一是入射光为平行的单色光。 分光光度计只能获得近乎单色的狭窄光带。复合光可导致对朗伯—比耳定律的正或负偏离。 非单色光、杂散光、非平行入射光都会引起对朗伯—比耳定律的偏离，最主要的是非单色光作为入射光引起的偏离。 A ? 克服方法： 尽量选用较好的单色器 入射波长?选择在峰值位置（在波峰有一个A值相差较小的区域） 2.非平行入射光 导致光束的平均光程b′大于吸收池厚度b，实际测得的吸光度大于理论值，产生正偏离。 朗—比耳定律的假定：所有的吸光质点之间不发生相互作用；假定只有在稀溶液(c10-2mol/L)时才基本符合，当溶液浓度c 10-2 mol/L 时，吸光质点间可能发生缔合等相互作用，直接影响了对光的吸收。 故：朗伯—比耳定律只适用于稀溶液。 (2) 化学性因素 A ? 散射、假吸收。 克服方法：避免溶液产生胶体或浑浊 入射光会因散射 而损失，导致T减小，实测的A偏高 溶液中存在着离解、聚合、互变异构、配合物的形成等化学平衡时。使吸光质点的浓度发生变化，影响吸光度。例： 铬酸盐或重铬酸盐溶液中存在下列平衡： 2CrO42- ＋2H＋ = Cr2O72- ＋H2O 溶液中CrO42-、 Cr2O72-的颜色不同，吸光性质也不相同。故此时溶液pH 对测定有重要影响。 2.3 目视比色法与可见分光光度法 　　一.目视比色法 　　 1.用同质材料的比色管 　　2.配制不同量的标准溶液 　　3.同量的显色剂，相同的实验条件，配成一套标准色阶 　　4.待测物与标准色阶的配制条件相同，置于色阶中比较颜色度 c4 c3 c2 c1 c1 c2 c3 c4 特点：简单、可测微量，复合光，误差大。 观察方向 观察方向 可见分光光度计 一、基本组成 光源 单色器 样品室 检测器 显示 1. 光源 在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。 可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在320～2500 nm。 紫外区：氢、氘灯。发射185～400 nm的连续光谱。 2.单色器 将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。 ①入射狭缝：光源的光由此进入单色器； ②准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束； ③色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅； ④聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝； ⑤出射狭缝。 3. 样品室 样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。 4. 检测器 利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光