利用实时定量PCR技术通过2-△△CT方法分析相对基因表达差异资料.docVIP

利用实时定量 PCR技术通过2 -△△CT 方法分析相对基因表达差异 Kenneth J. Livak and Thomas D. Schmittgen Department of Pharmaceutical Sciences, College of Pharmacy. Washington State University, Washington 99164-6534 现在最常用的两种分析实时定量 PCR 实验数据的方法是绝对定量和相对定量。绝对定量通过标准曲线计算起始模板的拷贝数；相对定量方法则是比较经过处理的样品和未经处理的样品目标转录本之间的表达差异。 2 - △△ CT 方法是实时定量 PCR 实验中分析基因表达相对变化的一种简便方法。本文介绍了该方法的推导，假设及其应用。另外，在本文中我们还介绍了两种 2 - △△ CT 衍生方法的推导和应用，它们在实时定量 PCR 数据分析中可能会被用到。 关键词：反转录 PCR 定量PCR 相对定量 实时PCR Taqman 反转录 PCR （ RT-PCR ）是基因表达定量非常有用的一种方法（ 1 － 3 ）。实时 PCR 技术和 RT-PCR 的结合产生了反转录定量 PCR 技术（ 4 ， 5 ）。实时定量 PCR 的数据分析方法有两种：绝对定量和相对定量。绝对定量一般通过定量标准曲线来确定我们所感兴趣的转录本的拷贝