真蛋白的检测方法.docVIP

测定的流程是，称取0.2-0.5g风干的植物材料，放入100ml烧杯中，加入50ml水，煮沸5min，在40-50下保温30min。徐徐加入10ml6%硫酸铜，摇匀，静置l h（或过夜）。过滤，残渣按凯氏定氮法将残渣消化，蒸馏，测定收集液中氨，计算得出含氮量。饲料中真蛋白的测定及其意义 饲料是畜牧养殖生产中的重要生产资料，饲料中蛋白质含量是判定饲料营养价值的一项重要指标，饲料中粗蛋白质包括真蛋白质和非蛋白质两部分含氮物质，后者主要包括游离氨基酸、硝酸盐、氨等，故不能反映出饲料蛋白质对动物的真正营养价值。目前，部分养殖场户存在一个认识误区，认为标签上标注的粗蛋白质高，营养价值就高。为此，部分饲料生产 企业利用人们认识上的误区，在饲料生产中添加羽毛粉、血粉、尿素等不易被动物肌体吸收的物质，饲料产品中粗蛋白含量上去了，但却没有相应的营养价值，造成养殖效益的低下。漯河市畜产品质量安全监测检验中心成立以来 ,每年要对送检的1000多个饲料样品进行蛋白质的测定，对如何测定饲料中真蛋白的含量、 有哪些注意事项，有了一些亲身的感受和认识，现提出与大家共同讨论、互相学习：1适用范围本操作方法适用配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。2?原理样品在水溶液中，加入过量硫酸铜，在碱性条件下，纯蛋白被氢氧化铜沉淀，用水洗去水溶性含氮物，沉淀部分按粗蛋白的测定方法测定其含氮量。3?试剂3.1? 10%硫酸铜溶液：称取五水硫酸铜10g用水溶解，转移至100ml容量瓶中定容至刻度。3.2? 2.5%氢氧化钠溶液：称取2.5g氢氧化钠用水溶解，转移至100ml容量瓶中定容至刻度。3.3? 硫酸：化学纯，含量为98%，无氮。3.4? 催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水，6g硫酸钠，均为化学纯，磨碎混匀。3.5? 氢氧化钠：化学纯，40%水溶液（M/V）。3.5.1? 配制方法：500g氢氧化钠+1100ml蒸馏水。3.6? 硼酸：化学纯，2%水溶液（M/V）。3.6.1? 配制方法：20.5g硼酸+1000ml蒸馏水。3.7? 混合指示剂：甲基红，1%乙醇溶液，溴甲酚绿，0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合， 在阴凉处保存期为三个月。3.7.1? 溴甲酚绿，0.5%乙醇溶液配置： 溴甲酚绿0.125g+25ml乙醇。3.7.2? 甲基红，1%乙醇溶液配置：甲基红0.025g+25ml乙醇。3.8? 盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB/T601制备。? 3.8.1?0.02mol/L盐酸标准溶液：1.67ml盐酸，分析纯，注入1000ml蒸馏水中。3.8.2? 0.1mol/L盐酸标准溶液：8.3ml盐酸，分析纯，注入1000ml蒸馏水中。 3.9?硫酸铵：分析纯，干燥。3.10? 蔗糖：分析纯。4? 仪器设备4.1? 实验室用样品粉碎机。4.2? 分样筛：孔径0.45mm（40目）。4.3? 分析天平：感量0.0001g。4.4? 电炉。4.5? 滴定管：酸式，25、50ml。4.6? 凯氏烧瓶：250ml。4.7? 凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸汽蒸馏式。? 4.8? 锥形瓶：250ml。4.9? 容量瓶：100ml。4.10? 烧杯：200ml。? 4.11? 干燥箱。5? 分析步骤5.1?半微量法5.1.1 样品的处理称取待测样品0.5-1g（精确到0.1mg）于200ml（4.10）烧杯中，加入50ml蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀，在电炉（4.4）上加热煮沸，加入20ml?10%硫酸铜溶液（3.1），再加入20ml?2.5%氢氧化钠溶液（3.2）搅匀，从电炉上取下，在室温放置2h，然后用倾泻法将样品过滤到滤纸上，用少量温水多次洗涤烧杯和沉淀物， 直至洗出液无硫酸根离子（用10%氯化钡溶液来检验滤液无沉淀），连同漏斗一起放入80干燥箱（4.11）中烘干，将滤纸和沉淀物小心放入250ml凯氏烧瓶（4.6）中，加入6.4g?催化剂（3.4），20ml?浓硫酸（3.3），在电炉（4.4）上消化，样液澄清后继续消煮2h，取下冷却后加入20ml蒸馏水，转入100ml?容量瓶（4.9）中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，做为试样分解液。同时做空白实验。? 5.1.2?蒸馏将半微量蒸馏装置（4.7）的冷凝管末端浸入装有20ml?硼酸（3.6）的吸收液和2滴混合指示剂（3.7）的锥形瓶（4.8）内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10-20ml? 注入蒸馏装置中，小心提起玻璃塞使之流入反应室，同时用蒸馏水冲洗蒸馏装置入口内壁使样品分 析液和冲洗液一并流入反应室，迅速将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，防止漏气。蒸馏4min?降下锥形瓶使冷凝管末端