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研究目的: ①进行最佳发酵工艺条件的优选和控制,如发酵过程中菌体浓度、基质浓度、温度、pH值、溶解氧等工艺参数; ②根据发酵动力学模型来设计程序,模拟最合适的工艺流程和发酵工艺参数,使生产控制达到自动化和最佳化; ③为试验工厂数据的放大和分批发酵过渡到连续发酵提供理论依据。 (1) 停滞期 停滞期是微生物细胞适应新环境的过程。 接种物的生理状态和浓度影响停滞期的长短。 (2)对数生长期 处于对数生长期的微生物细胞的生长速率大大加快,单位时间内细胞的数目或质量的增加维持稳定,并达到最大值。 此时,如以细胞数目或生物质量的对数值对培养时图,将得一直线,该直线的斜率就等于μ。 微生物的最大比生长速率在工业上的意义 为保证工业发酵的正常周期,要尽可能地使微生物的比生长速率接近其最大值。 最大比生长速率不仅与微生物本身的性质有关,也与所消耗的底物以及培养的方式有关。 限制微生物生长代谢的并不是发酵液中营养物质的浓度,而是营养物质进入细胞的速度。 (3)稳定期 在细胞生长代谢过程中,培养基中的底物不断被消耗,一些对微生物生长代谢有害的物质在不断积累。受此影响,微生物的生长速率和比生长速率就会逐渐下降,直至完全停止,这时就进入稳定期。 处于稳定期的生物量增加十分缓慢或基本不变;但微生物细胞的代谢还在旺盛地进行着,细胞的组成物质还在不断变化。 微生物的很多代谢产物,尤其是次级代谢产物,是在进入稳定期后才大量合成和分泌的。 (4)衰亡期 在衰亡期,细胞的营养物质和能源储备已消耗殆尽,不能再维持细胞的生长和代谢,因而细胞开始死亡。 在发酵工业生产中.在进入衰亡期之前应及时将发酵液放罐处理。 细胞总量的变化率 如果进行恒速流量为F,则 随着培养基的流加,细胞浓度逐渐增大,限制性基质浓度逐渐减小,最后限制性基质浓度趋向零,而细胞浓度则趋于定值,dS/dt=0 , dX/dt ≈0,进入拟稳态。这时μ≈D。 (1)恒化器 是一种使培养液流速保持不变,并使微生物始终在低于其最高生长速率条件下进行生长繁殖的一种连续培养装置。 称为外控制式的连续培养装置,通过控制某一种营养物的浓度,使其始终成为生长限制因子的条件下达到的稳态连续培养。这样,既可获得一定生长速率的均一菌体,又可获得虽低于最高菌体产量,却保持稳定菌体密度的菌体。 在恒化器中,一方面菌体密度会随时间增长而增高,另一方面,限制生长因子的浓度又会随时间的增长而降低,两者互相作用的结果,出现微生物的生长速率正好与恒速流入的新鲜培养基流速相平衡。 (2)恒浊器 是根据培养器内微生物的生长密度,并借光电控制系统来控制培养液流速,以取得菌体密度高、生长速度恒定的微生物细胞的连续培养器。 可称为内控制式的连续培养装置,当培养基的流速低于微生物生长速度时,菌体密度增高,这时通过光电控制系统的调节,可促使培养液流速加快,反之亦然,并以此来达到恒密度的目的。因此,这类培养器的工作精度是由光电控制系统的灵敏度来决定的。 在恒浊器中的微生物,始终能以最高生长速率进行生长,并可在允许范围内控制不同的菌体密度。在生产实践上,为了获得大量菌体或与菌体生长相平行的某些代谢产物如乳酸、乙醇时,都可以利用恒浊器。 2,活塞流反应器 这是一种不均一的管状反应器,培养基由反应器的一端流入,而从另一端流出。 在这种反应器中,没有返混现象,因而,反应器内的培养基呈极化状态,在其不同的部位,营养物的成分、细胞数目、传质效果、氧供应和生产量都不相同。 对于这类反应器,在其入口处,加入物料的同时也必须加入微生物细胞。通常是在反应器的出口处装一支路,使细胞返回,也可以来自另一连续培养装置(种子供应系统)。 管道非均匀混合连续发酵 连续培养在生产上的应用还很有限的原因 ①许多方法只能连续运转20一200小时,而工业系统则要求必须能稳定运行500一1000小时以上; ②工业生产规模长时间保持无菌状态有一定困难; ③连续培养所用培养基的组成要保持相对稳定,这样才能取得最大产量,而工业培养基的组成成分,如玉米浆、蛋白胨和淀粉等,在批与批之间有时会出现较大变化; ④当使用高产菌株进行生产时,回复突变可能发生。在连续培养过程中,回复突变的菌株有可能会取代生产菌株而成为优势菌株。 ⑤对于某些原材料价格昂贵的产品,由于连续发酵对基质利用率较低,往往造成生产成本的增加。 (二)连续发酵动力学 物料衡算 积累速率=流入速率-流出速率-反应消耗速率 (三)连续培养与分批培养的比较 假定分批培养的指数生长期延续到限制性基质耗尽,则分批培养的生产周期 其中 X0 —— 细胞初始浓度 XF —— 细胞最大细胞浓度 tB —— 分批培养一个生产周期所需时间;
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