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2017-02-14 发布于北京
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荧光蛋白标记亚细胞定位扬州大学生物科学与技术学院扬州大学生物科学与技术学院生物化学精品课程扬州大学生物科学与技术学院问题的提出一直以来，人们已经掌握一些方法以评价蛋白的化学和物理状态但是存在一些基础的问题，如何直接理解蛋白在细胞内的的生物活性，因此，我们需要在活细胞体内检测这些蛋白，以利用了解以下信息 2. 目的蛋白与哪些其他蛋白相互作用 1. 目的蛋白定位在什么地方? 这些问题能够通过以下实验揭示 (1) 蛋白荧光细胞定位 (2) 酵母双杂交，免疫共沉淀，荧光共振能量转移荧光蛋白标记细胞定位将目的基因与绿色荧光蛋白基因（EGFP）融合，通过绿色荧光蛋白的荧光效应以对目的蛋白进行亚细胞定位 P Target 启动子目的蛋白基因终止子 P Target EGFP 限制性内切酶位点 Linker (poly-G) 荧光亚细胞定位的设备: 激光共聚焦显微镜激光共聚焦显微镜所发射的光能聚焦在样品的一个非常薄的切面上。激光共聚焦显微镜的优点是其能剔除非焦平面来源的任意光线。实验方法克隆目的基因的开发阅读框将目的基因与EGFP基因融合（在哺乳动物细胞中，一般选用pEGFP系列质粒载体）将质粒转染细胞在不同的时间点在激光共聚焦显微镜下观察EGFP在细胞中的定位，如有必要需进行亚细胞组分的染色，例如细胞核染色（一般可用PI, DAPI或Hochist);内质网染色或线粒体染色。扬州大学生物科学与技术学院生物化学精品课程