脓汁和粪便标本中病原菌的检测-3.ppt

空气细菌检查结果分析 细菌菌落直径1～3mm，有光滑型、粗糙型、粘液型。 霉菌菌落比较大，呈棉絮状、绒毛状。 霉菌和酵母菌最适培养温度为25℃～28℃。 计数菌落形成单位（CFU）,报告结果。 手指皮肤细菌检查结果分析 比较洗手前后细菌的种类。 洗前细菌种类多。 洗后细菌种类少。 洗手能洗掉大多数暂住菌。 比较常规和标准洗手的细菌数量。 常规（简单）洗手，平板上细菌数量少。 标准洗手，平板上细菌数量多。原因：常住菌数量大，牢固附着在皮肤上，常洗不掉， 可洗松动，经摩擦接种、脱落到培养基上，显示细菌更多？ 外科手术人员洗手？ 碘酒和酒精棉球消毒以后，有没有细菌生长？ 空白对照有没有细菌生长？ 脓汁和粪便标本中病原菌的检测实验流程(6次课12学时） 金黄色葡萄球菌菌落特征 链球菌菌落特征 伤寒沙门菌菌落特征 志贺菌菌落特征 大肠埃希菌菌落特征 细菌的纯培养 Pure Cultures 脓汁标本在普通平板上有金黄色、白色两种菌落，菌落的色素是脂溶性的，是细菌本身的颜色。菌落直径2mm左右、圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明。 粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落，菌落色素是水溶性的，不是细菌本身的颜色，颜色的产生是因为大肠埃希菌分解乳糖产酸，酸使伊红与美蓝结合，形成紫黑色具有金属光泽、大而隆起、不透明的菌落，菌落直径2～3mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈伊红的颜色，淡粉红色，半透明，直径1～2mm。 若培养、放置时间过长或者平板上某个部位细菌比较多、菌落比较密集，大肠杆菌菌落颜色可能会发生改变。因为大肠杆菌利用完乳糖以后，就要利用蛋白质，蛋白质分解大多产生碱性物质，中和了乳糖分解时产生的酸。大肠杆菌菌落可能会由原来的紫黑色变成粉红色，或者菌落中心黑色，边缘粉红色。 斜面接种分工 甲→普通平板→金黄色菌落(auratus，golden yellow)→1支斜面 黄色菌落可能是空气污染的杂菌（黄色小球菌），不能挑选。 乙→普通平板→白色菌落(albus，white)→1支斜面 丙→ EMB平板→紫黑色菌落(atropurpureus)→1支斜面 丁→ EMB平板→粉红色菌落(pink) →1支斜面 戊→ EMB平板→粉红色菌落(pink)→1支斜面 ※斜面正面上2/3作标记： 组号 + 金黄、白色、紫黑、粉红。 生物安全警告 接种环接种斜面一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。 气溶胶粒径＞100um沉降很快,＜50um在0.4s内扩散开,＜5um通过呼吸道直接到达肺泡。 Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。 实验时应坐着，在火焰周围10～20厘米内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。 灭菌 收集平板 → 灭菌桶内（平板底部朝下，盖朝上放置） → 速送灭菌室 → 高压蒸汽灭菌 → 洗刷。 油浸镜的原理 显微镜油镜的使用P13 将标本放置、移动到光路上，用“黄色圈”的10×物镜找到、看清楚标本。 将聚光器调到最高处。 调整孔径光阑,将与物镜相对应倍率调到正面（10×→100×）。 在标本观察部位上滴加一滴香柏油。 将“白色圈”100×物镜放入光路，浸泡于香柏油中，可看到模糊物象。 调整亮度及微调旋钮，直到物象清晰为止→观察物象，记录结果→关闭电源。 油镜处理：擦镜纸拭去香柏油 →擦镜纸沾少许乙醇和乙醚（3:7）混合液擦拭→擦镜纸擦拭油镜。 显微镜罩上防尘罩→ 横放在实验柜内。 ※ (顺德校区）实验台两侧的电源插座，只能插入一个插头，请选择离你最近的电源插座。 ※（校本部）实验台中间，三个位的插座，中间那位插孔没有电，不能使用，只能用两侧的插座。 医学微生物学实验综合性实验三、一 空气、手指皮肤的细菌学检查结果分析 脓汁和粪便标本中病原菌的检测 菌落特征观察P11 细菌纯培养P10 油镜使用方法（讲解） 脓汁标本检验 （录像） 肠道致病菌的分离鉴定（录像） 思考题 在微生物学实验中,怎样才能避免杂菌的污染? 空气的卫生标准规定如何? 你的实验结果说明了什么问题? 怎样从医务人员手指上分离和鉴定金黄色葡萄球菌? 菌落特征主要描述哪几方面问题？如何挑选单菌落？ 调整聚光镜位置和孔径光阑 用聚光镜上下移动旋钮①，将聚光镜转到最上面。 在孔径光阑环②上刻有物镜倍率（10倍，100倍等），观察时将与使用物镜相对应的倍率放到正面。 转换物镜 旋转物镜转盘①，将希望使用的物镜（10倍、100倍）转到标本的上方。 100倍浸油物镜使用方法 油镜放入光路之前，一定要在标本的观察部位上加一滴浸油。 旋转物镜转盘，使油镜进入光路，用微调旋钮对好焦距。 如果浸油内有气泡，会影响观察，可稍微旋转物镜转盘，使油镜来回通过1～2次浸油