893-专题10 基因工程.doc

专题10 基因工程 【教法指引】 遗传工程在内容上和必修2教材中的基因工程相似，但是必修2中的基因工程主要侧重于基本原理的阐述，而本专题主要侧重于基因工程基本技术及应用前景的介绍，4个考点中有2个要求为Ⅱ，是选修3中的一重要命题领域。纵观近几年高考中，命题主要集中在“基因工程的原理、技术和应用”，赋分比重较大。 【专题要点】 本专题的重点就是基因工程的原理、技术及其应用，这是高考的重点、热点，也是我们复习的重点。本专题的知识可归纳如下： 一、基因工程的概念 1.基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。 2. 理论基础 DNA是遗传物质的证明 DNA双螺旋结构和中心法则的确立 遗传密码的破译 3.技术支持 基因转移载体的发现 工具酶的发现 DNA合成和测序技术的发现 DNA体外重组的实现 重组DNA表达实验的成功 第一例转基因动物的问世 PCR技术的发明 二、基因工程的基本工具 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） （1）来源：主要是从微生物中分离纯化出来的 （2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。 （3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式即黏性末端和平末端。 2.“分子缝合针”——DNA连接酶 (1)两种DNA连接酶（E·coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键。 ②区别：E·coliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。 (2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。 3.“分子运输车”——载体 （1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存； ②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入； ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。 （2）最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的环状DNA分子。 （3）其它载体：噬菌体、动植物病毒 三、基因工程的基本操作程序 第一步：目的基因的获取 1.目的基因是指：编码蛋白质的结构基因 2.目的基因的获取方法： 从供体细胞直接提取——主要是原核生生物基因 从基因文库中获取 利用mRNA反转录形成 利用PCR扩增技术 人工化学法合成 3PCR技术扩增目的基因 （1）原理：DNA复制 （2）过程：加热至90～95℃DNA解链→冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链→加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。 第二步：基因表达载体的构建 1.构成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因 （1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能启动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。 （2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段 ，位于基因的尾端，终止基因的转录。 （3）标记基因：一段特殊的基因序列，主要是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来，常用的标记基因是抗生素基因。 2.构建：以质粒作载体为例 第三步：将目的基因导入受体细胞 1.转化：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 2.常用的转化方法：受体细胞不同导入方法有所不同 植物细胞：最常用的是农杆菌转化法，其次还有基因枪法和花粉管通道法等，受体细胞可以是植物体细胞 动物细胞：最常用的是显微注射技术，受体细胞多是受精卵 微生物细胞：先用Ca2+ 处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程根据蛋白质的结构与功能之间的关系，，定向改造天然蛋白质，甚至创造自然界不存在的、具有优良特性的蛋白质。蛋白质，定向改造 6