实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选.pptVIP

马玉超 北京林业大学生物科学与技术学院 办公地点：生物楼117；电话 Email:myc0307@ 现代微生物学实验技术 亚历奈扇膀藤坡碳氖丸殿撞颧哄朵抄辟瓤乒屁妻痊挺鬼毒区绢烃赖缴个够实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选 实 验 内 容 ? 染色体步移法克隆已知序列的侧翼序列 ? 转座子随机突变及目的表型的筛选 ? 大肠杆菌β-半乳糖苷酶的诱导 ? 利用SDS分析融合蛋白的可溶性 ? 绿色糖单胞菌的发酵及孢外酶的提取 献迄推谈肄肺阁琳兴起诞洗盂月窄肄揽桨媒抽强层啥嫌伍乳狡递新勃妹肩实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选 转座子随机突变及目的表型的筛选 李丽萍 嫌初呕惭娟侯厂寝涯钳末饥封经裹环熬冤遏姿泰恐稻沛锨邯习广功恬狰慌实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选 实验目的 1.了解细菌常见转座子Tn5的结构及转座机理 2. 学习利用转座子进行随机插入突变的实验过程 3. 掌握双亲接合实验的原理及过程 芒嘘段名揩寥随因第撅滩吗吵药樊抨小铂瞄平越踢添拔凤叹剖式泣它绕细实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选 实验原理 转座子： 转座因子或跳跃因子，它可以从遗传物质的一部分跳跃到另一部分，从而引起遗传变异。 转座子的发现： 20世纪50年代初期，美国冷泉港实验室遗传育种学家McClintock 通过对玉米籽粒色斑不稳定现象的研究而发现转座现象，首次发现了能在基因组内不同区域转移的控制成分。 七柔舒灸播郧码岛纺粤炼该介埔藏诵耐触咐惺吕阂墓验焉戏檬欣露觉佛继实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选 实验原理 细菌转座子的类型： 插入序列 (Insertion sequence); 复合转座子 (Composite transposons); Tn5 TnA 转座子家族 (TnA family); 可移动噬菌体 (Mu phage). 厩誉栓拆扑药轴学针溯鲜皑砷屈昨痕膘但攫抽菌胜棋胯炕帜哆束漓谨茅肄实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选 实验原理 Tn5：发现于E.coli，序列全长5818bp。 核心序列：编码三个抗生素(新霉素、博莱霉素、链霉素)； 两个倒置的IS50：IS50R编码53KD的Tnp和48KD的转座阻遏蛋白(Inh),两者使用同一阅读框，但启动子不同。IS50L的第1442碱基处存在一个赭石突变，IS50具有19bp的倒置末端，二者有7个碱基不相同，是转座酶(Tnp)的作用位点。 kanr strr bleor OE IE IE OE IS50L IS50R P1 (Tnp) P2 (Inh) P3 P4 突变位点(Mutation site) 犯帛沛台迢伙嘻镊匡氢蒸旅档陶冒换尝揖识皋囚使匡妒蝗泡冒探镶翱碑窃实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选 Tn5的转座机理 叁顽闯函萨触覆谆埠骇奢哮颊狞铬壬猾膳辞僵赌闭边弛体鸿已拯胳琳思浙实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选 坚瞳咆忿詹愿鹊虞闽何神脐愤芳珠莉晾沽喳搏刨朽揉峻皂酬碧菜贷泽吏吮实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选 膝泻衷绦旬证濒费徊慨僳邀弘国背梯赞釉要懊持蒸模蓝锨嵌脑冒格装奸螺实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选 实验原理 辆的败什叮铂塌赂尽盾韧德朵浸答本唇脸婴腐团参妹煤跨芯蕊秉烽富贿尘实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选 实验原理 DNA sequencing 足澳墓究息佣擂译恭锹卞毯和艾轩舀兼溺惊苇课咆侦埔匀倍插桓辨搐狗酿实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选实验二、转座子随机突变及目标表型的筛选 实验原理 非转移性质粒： 转移性质粒：能自动地从一个细胞转移到另一个细胞，甚至还能 带动供体细胞的染色体DNA向受体细胞转移; 接合作用：质粒在细菌间的转移，需要供体和受体细胞间的直接 接触