5-牛蛙骨髓染色体标本的制备与观察.docVIP

报告成绩 实时记录成绩 实验五 牛蛙骨髓染色体标本的制备与观察 学生姓名 学号 班级 座位号： 同组同学 日期： 年 月 日 备注： 【Introduction】 （1）） 【Materials methods】 0℃）。 实验材料：肉用成体牛蛙（两组1只）。 实验试剂：0.65％生理盐水；甲醇—冰醋酸(3:1)固定液；蒸馏水；自来水;Giemsa染液。 实验操作： 1．动物前期处理：牛蛙称重→注射秋水仙素→3.5~4小时后麻醉→取牛蛙→肢解。 2．取骨髓：剪下四肢→剔骨→剪开骨髓腔→生理盐水冲洗→分四0度下静置20 min。 4．固定：离心→弃去上清液→加甲醇-冰醋酸固定液l ml→固定15分钟→吹打悬浮→重复上面步骤一次→离心→弃去上清液→吹打悬浮。（一共固定2次） 5．滴片：从冰箱取出载玻片→立即从高处滴20 μl悬液→待干燥。 6．染色：放入Giemsa液中染色20分钟→自来水缸中浸去浮色→待干燥。 7．镜检：首先10倍镜下找到线团状细胞核→转到40倍镜下拍照保存→如果效果不好可转回镜寻找满意图像后 【Results】 所示，油镜下可以观察到深色的细胞核以及的线团状细胞核。%左右，有染色单体四条臂中间着丝粒。染色体2n=26。我观察到的略有重叠，分的不是特别 【Discussion】 答：）在下，所以温度应该足够，可能是可能是后放置一会儿，70厘米应该足够还可能是其散 （2）是不够，或者可能是或者油镜不干净所以每次 答：。 再对父亲做类似检查便可1]。 【Questions】 答：秋水仙素的作用是影响可以到比较多的，显微镜下能观察得比较清楚的是致癌的作用，尽量避免直接接触。 答：低渗处理是凭借反渗透作用原理 3. 骨髓细胞染色体制备实验中为什么滴片需要用预冷酒精浸泡的载玻片? 答：预冷酒精浸泡的载玻片既是低温处理过的，又借酒精的挥发提供低温环境，造成有利于滴片。。 答： 如下表所示。解离染色）离心干燥离心干燥盐酸纤维素酶和果胶酶混合酶液植物细胞壁。2] 【References】 1 2 去壁低渗法制备植物染色体标本实验: /link?url=cUedFoatwYW1_ofZ8Vqy7UBGReHRja5XFVdIJlUr0z6h9i8GxxAqbT10jtxoBRNrcYAI9enVUOZcIDCeDyC5f2lA6B-dYdFQANdk2xEyq07 实验五 牛蛙骨髓染色体标本的制备与观察 学生姓名 学号 班级 座位号： 同组同学 日期： 年 月 日 备注： 【】 具体步骤 备注 1动物前期处理 牛蛙称重→每克体重2微克的剂量腹腔注射秋水仙素溶液(用0.65％生理盐水配制) →注射后3.5~4小时，用过量乙醚或氯仿麻醉牛蛙。 派1名同学戴一次性手套，以搪瓷盘取牛蛙→回实验桌后进行肢解。 2取骨髓 （1） （2） （3） 3低渗 每管悬液加蒸馏水lml→吹打混匀→30度下静置20 min。 低渗的时间和温度必须控制好 4固定 悬液3000转/分离心5分钟→小心弃去上清液→每管加甲醇-冰醋酸固定液l ml→固定15分钟→吹打悬浮→重复上面步骤一次→然后3000转/分离心5分钟→小心弃去上清液（每管约900 μl）→留少量残液吹打悬浮。 固定2次 5滴片 取悬液20 μl →从高处滴加到预先冷冻、用酒精浸泡的载玻片上（滴加在载玻片靠近一端处）→并吹口气令细胞自然散开→等待干燥。每人做2片。 载玻片从冰箱取出立即滴加悬液。 干燥时在一端做好标记。 6染色 放入Giemsa液中染色20分钟→在自来水缸中浸一下，洗去浮色→滤纸吸干底面和周围水分→待干燥。 7镜检 首先在10倍镜下找到松散的团装，类似于线团，其染色比致密的细胞核颜色浅。 转到40倍镜下，应能看到呈X型的中期染色体，如分散较好的图像可以看清结构并数清其条数。可直接拍照保存，并记录下该图像大致位置（载物台上标本移动轴上对应位置）。 在40倍镜下将图像移至视野正中央，再下降载物台，滴香柏油转油镜观察图像，拍照保存。 观察完毕立即清理油镜镜头。 分析所得标本中细胞密度是否适中，分裂细胞的比例如何，处于分裂中期相的细胞数量情况，染色体形态、数目、有否重叠等