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第一章 细胞培养的基本知识 第一节 前 言 细胞培养(cell culture)是指细胞的离体培养，包括单个细胞的培养。具体说来，是指在无菌条件下，把动物或植物的细胞从有机体中分离出来，置于培养器皿中，并在一个合适的环境中，给以营养物质，使之继续生存和生长的方法。广义上的细胞培养包括器官培养(organ culture)、组织培养(tissue culture)和细胞培养(cell culture)。但因从组织块生长出来的仍然是细胞，细胞在生长的同时发生移动，使得培养中的组织难以长时间保持其原有的结构，因此三者并无严格的区别。一般所说的细胞培养，即包括器官培养、组织培养和细胞培养三层含义。 细胞培养的发展历史已近百年。最初的细胞培养是胚胎学和微生物学的引申，建立于无菌原则的基础上，用天然体液(如胎汁、血浆)来维持从整体切下的组织块，以对细胞进行形态和功能的观察。Harrison和Careel(1907, 1910)首创了盖片覆盖表玻璃的悬滴培养法，建立了离体培养组织和细胞的基本模式。后来许多学者在培养容器、培养液和培养操作技术方面加以改进和革新：在卡氏瓶的启示下，设计出多种类型的培养瓶；培养基由天然动物血浆改进为合成培养基；促细胞生长物质从胎汁改为动物血清；Dulbecco(1957)等采用胰蛋白酶消化处理组织，获得了单层培养物，对细胞培养的发展起了积极的推动作用，单层培养遂成为细胞培养普遍采用的技术。采用单层培养法建立了各种细胞系和细胞株，现在全世界储存的细胞株约有万种以上。Sanford(1948)创立了单细胞分离培养法，应用这一技术可建立遗传性状相同的克隆细胞株(clone strain)。今天的组织培养已可把多细胞机体中各种完整的细胞和组织从错综复杂的体内影响和相互关系中分离出来，置于离体因素的直接作用下，长时间直接观察活细胞的形态结构和生命活动过程，并可利用不同的技术方法，如相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、同位素标记以及缩时显微电影等观察、记录和研究细胞。体外培养使体内非常复杂和相互依赖的关系简化，能对细胞施加物理、化学和生物等外来实验条件，便于进行单一因素对细胞影响的研究和对机理的分析，提供与体内生物性状相似的对比物，综合分析体内外实验所得的结果，更好地得到体内连续实验很难得到的结论，同时也更为经济实用。现在细胞培养不仅是细胞生物学必需的技术，而且也是分子生物学、肿瘤学、遗传学和免疫学等学科必要的方法，同时也日益成为生物工程的生产手段，如大规模的中空纤维培养法，能用于工业化生产多种生物制品如激素、生长因子和单克隆抗体等。 细胞培养的优点就在于：(1) 便于应用各种物理、化学和生物等外界因素探索和揭示细胞生命活动的规律；(2) 便于应用各种不同的技术方法研究和观察细胞结构和功能的变化；(3) 可长期研究和观察细胞遗传行为的改变；(4) 可提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗资少，比较经济；(5) 可为动、植物基因组的长期保存提供一种行之有效的手段。 尽管细胞培养具有很多优点，但也存在一定的不足。其最根本的问题是尽管培养技术不断发展，并努力创造条件以模仿动物体内的状态，但体外培养的组织或细胞与体内相比仍然存在着较大的差异，特别是细胞分化的问题。可以说，任何组织或细胞经过体外培养后，其细胞形态和功能都会发生一定程度的改变。因此对于体外培养的细胞，应该把它们视为一种既保持动物体内原细胞的一定性状、结构和功能又具有某些改变的特定细胞群体，而不能将之视为与体内相应的细胞完全等同。另外，体外长期培养的细胞，尤其是经过反复传代、长期培养者，有可能发生染色体非二倍性改变等情况。 但从总体上来说细胞培养确实是一种研究活组织和细胞的良好方法。利用这一技术，可进行多方面的研究。归纳起来，可有以下四个方面：(1) 细胞与细胞之间的相互作用。如细胞与细胞之间的粘附作用、接触抑制、细胞识别以及密度抑制等；(2) 细胞内部与细胞外界环境之间的作用，如细胞对外界刺激的反应、药物对细胞的作用、细胞内产物的分泌等；(3) 细胞内细胞质的各种生理活动，如能量代谢以及细胞内核酸、蛋白质的合成等；(4) 细胞质与细胞核之间的物质信息流动，如RNA从细胞核到细胞质的移动、激素受体复合物的移位等。 总之，目前细胞培养仍然是细胞生物学研究方面的一项十分重要的技术，应用范围极为广泛，如病毒学、细胞免疫学、遗传学、细胞的分化与发育、肿瘤细胞学、细胞生物化学、细胞的超微结构、原生质体培养、细胞工程以及临床医学及生物技术方面的应用等方面，都需要借助于这一项技术。因此，它的发展前途是不可估量的。 第二节 培养细胞的特性 一、培养细胞的生长方式及类型 细胞离体培养时，失