罗非鱼无乳链球菌的病理学观察2.docVIP

罗非鱼链球菌病的病理学观察祝璟琳，李大宇，邹芝英，肖 炜，乐贻荣，韩 珏，杨 弘( 摘要：采用光学显微镜和透射电子显微镜技术分别对患(Streptococcus agalactiae)病的罗非鱼的病理学变化进行了研究。研究表明，链球菌能造成罗非鱼全身性组织器官病变，功能障碍，最后导致死亡。 关键词：罗非鱼; 链球菌; 病理 中图分类号：S941 文献标识码： A 无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)也称B族链球菌(Group B Streptococcus，GBS)，是一种广泛分布于自然界的革兰氏阳性菌，可引起新生儿脑膜炎、败血症及肺炎等(Jones et al., 2003; Brochet et al., 2006; Johri et al., 2006)，同时它也感染其它包括猪、牛、鱼等多种脊椎动物。目前已有12多个国家报道了鱼类链球菌病的暴发与流行，受感染的鱼类包括多种海水和淡水鱼类，罗非鱼等温水性鱼类受链球菌的危害尤其严重(祝璟琳等，2010；Duremdez et al., 2004；Suanyuk et al., 2008；Hernández et al., 2009；Evans et al., 2009；Mian et al., 2009)。自从2009年首次大规模爆发的以来，无乳链球菌已成为我国罗非鱼病害的最主要致病菌，且目前尚无有效控制手段（祝璟琳等，2010；柯剑等，2010）。近两年该病又呈现发病区域逐年扩大、发病率和死亡率逐年升高，易感罗非鱼规格范围逐年扩大等新趋势，对养殖户造成了严重打击。 尽管已经明确了罗非鱼链球菌病的病原菌和危害性，但迄今为止，人们对罗非鱼无乳链球菌的了解仅局限于疾病描述、病原鉴定（祝璟琳等，2010；柯剑等，2010），药敏试验（祝璟琳等，2010；卢迈新等，2010），PCR检测方法（双重PCR，三重PCR，巢式PCR）（王均等，2011；黄锦炉等，2012；Jiménez et al., 2011），中草药防治（吴颖瑞等，2013）和相关疫苗的研制（陈贺等，2012；Pasnik et al., 2006; Pretto-Giordano, et al., 2010），而对疾病的发生与发展规律缺乏深入了解。国外虽有文献对无乳链球菌引起罗非鱼的组织病理变化做了广泛研究(Miyazaki et al.,1984, Eldar et al., 1995, Chang and Plumb, 1996, Chen et al., 2007, Filho et al., 2009, Hernndez etal. 2009, Zamri-Saad et al., 2010), 但尚未见病理学报道。本JQ990153)引起自然发病的罗非鱼较为系统地研究了该的病理学特征，旨在为罗非鱼链球菌病的临床诊断，致病机理及预防提供基础资料。 1 材料与方法 1.1 病鱼 患病鱼取自广西壮族自治区某养殖场，选择具有典型症状的濒死病鱼，00）g。尼康80i日立H-7650型 1.3 组织病理观察 取病鱼肝脏、脾脏、肾脏、脑、骨骼肌、肠、鳃等组织用Bouin’s液固定梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，KD2258型切片机连续切片，厚度为4～7 μm，H.E常规染色，中性树胶封藏，尼康80i显微镜下观察拍照。 1.4 超微细胞病理观察 将病鱼的脑、肝脏、脾脏、心脏、骨骼肌等组织分别切成约1 mm3小块迅速用2.5 %戊二醛固定。0.1 mol/L磷酸缓冲液漂洗，1％锇酸固定2 h，磷酸缓冲液漂洗，梯度和丙酮脱水，Epon812环氧树脂包埋，超薄切片，醋酸铀和柠檬酸铅双染色，日立H-7650型透射电镜观察并拍照。 2 结果 2.1 临床症状 自然感染的病鱼角膜混浊，泳姿衡，水间歇性打转在池边离群慢游，。解剖见肝脏脾脏充血，具有β溶血活性Ⅰ-1)，无运动性、无芽胞，光学显微镜下的菌体单独或成链状形态出现。透射电镜负染观察，菌体球形或卵圆形，直径0.6～1.0 um，多数呈双球菌或链状排列(图版Ⅰ-2)。 2.3 组织病理变化肝：图版Ⅱ。脾：图版Ⅱ图版Ⅱ肾：图版脑：，并伴有淋巴细胞浸润图版Ⅱ。图版骨骼肌纤维肿胀，断裂，弯曲不齐，肌纤维间隙增大图版。图版图版2.4 超微病理肝：图版Ⅲ 脾：图版Ⅲ图版Ⅲ。肾：图版Ⅲ脑：图版Ⅲ图版Ⅲ。骨骼肌图版Ⅲ图版Ⅲ图版 3 讨论 (Eldar et al., 1995, Suanyuk et al., 2005, Suanyuk N et al., 2008, Musa et al., 2009, Mian et al., 2009, Abuseliana et al., 2010, Zamri