虫草香菇多糖口服液对人SCG7901胃癌细胞株活性的抑制机理研究.docVIP

虫草香菇多糖口服液对人SCG-7901胃癌细胞株活性的抑制机理研究 摘要：目的 观察虫草香菇多糖口服液对人胃癌SCG-7901细胞株活性的作用，初步探讨其作用的时效和量效关系，为该药应用于胃癌治疗提供实验依据。方法按照倍比稀释原则配制8个不同浓度的培养药液，作用于人胃癌SCG-7901细胞24h、48h、72h后，采用噻唑盐（MTT）比色法测定各培养孔的OD值，并计算其细胞生长抑制率（IR，%）。结果 不同作用时间比较和不同浓度间比较，均具有显著性差异，F=566.685，P0.05和F=33.041，P0.05；在作用48h-72h之间所能达到的最高抑制率为70.56%，与终浓度为100μg/ml的环磷酰胺相当。结论 低浓度的虫草香菇多糖口服液可提高人胃癌SCG-7901细胞株的细胞活性，中、高浓度口服液则可显著降低其细胞活性，其抑制作用存在量效和时效依赖性，最高抑制率为70.56%。 关键词：虫草香菇多糖；人SCG-7901胃癌细胞；体外实验；量效关系；时效关系 据有关媒体报道，国家发明专利药物虫草香菇多糖口服液（专利号：200910080253.3）对多种癌症具有较好的资料效果，本文通过体外实验，观察了虫草香菇多糖口服液对人SCG-7901胃癌细胞株活性的作用，现总结如下。 实验材料与方法 1.1 .靶细胞株 人胃癌SCG-7901细胞株，为河南省生物工程技术研究中心冻存。 1.2 主要仪器及试剂 INCO2/108型CO2培养箱，德国MEMMERT公司产品；MK3型酶标仪，Thermo Labsystems 公司产品；XD-101型倒置显微镜为上海精密仪器仪表有限公司产品；96孔细胞培养板和24孔细胞培养板均为NUNC产品；RPMI-1640为Gibco BRL产品，MTT和DMSO为Sigma产品，其他试剂均为国产分析纯。 1.3 培养药液的配置与实验分组 将虫草香菇多糖口服液（批按5000rpm转速离心10min，尽取上清，高温高压灭局，作为储备液，封口后4°C冰箱保存备用。使用先配置成口服液终浓度为0.5、1、2、4、8、16、32、64μl/ml的RPMI-1640培养药液，作用于细胞时分别命名为浓度1、浓度2、……浓度8组，并以不加药品的标准RPMI-1640培养液作为本实验的阴性对照组，以终浓度为100μg/ml的环磷酰胺（CTX）作为本实验的阳性对照组。 1.4 噻唑盐（MTT）比色法进行体外细胞药物敏感性试验 将人胃癌SCG-7901细胞柱传代至对数生长期后，经胰酶-EDTA液消化，以台盼蓝拒染试验调整细胞悬液终浓度为2×104/ml，接种于96孔培养板中，每孔200μl。置37°C 、5%CO2温箱培养使细胞贴壁，常规24h后，弃去板上各孔内原有液体，再分别换上含有相应浓度药物的药物培养液200μl，于37°C 、5%CO2 培养箱中培养，每个药物每浓度设3个平行孔。分别于作用24h、48h、72h后，小心吸去上清，每孔加入80μl新鲜RPMI1640培养液，再加入20μl MTT溶液（5mg/ml，即1.5%MTT），继续培养4h，弃去96孔板上各孔中原有液体，每孔再加入DMSO 200μl，置摇床上低速震荡10min，以充分溶解结晶微粒，用酶标仪在492nm波长下测定各孔的吸光值（OD值），以不加药的阴性对照组A492的OD值均数作为对照，重复上述实验两次，以验证两次，以验证可重复性。细胞存活率及药物对细胞的抑制率按下式计算：细胞生长抑制率（IR，%）=（阴性对照组平均值OD值-用药组平均OD值）÷（阴性对照组平均吸光值）×100%； 1.5 统计学方法 数据采用SPSS13.0统计分析软件进行分析处理，资料采用均数±准差进行描述，组间比较采用析因设计方差分析和重复测量资料的方差分析，以a=0.05作为检验水准。 2 结果 不同浓度虫草香菇多糖口服液对人胃癌SCG-7901细胞株活性及抑制率的影响，见表1及图1、图2。 表1 虫草香菇多糖口服液对人胃癌SCG-7901细胞株活性的 作用时期 OD值（mean±SD）