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基因进入受体细胞的载体--- “分子运输车” 三、“分子运输车” ——基因进入受体细胞的载体 ⒈载体需要的条件： 　　⑴有1~多个限制酶切点 　　⑵对受体细胞无害 　　⑶导入基因能在受体细胞中复制、表达 　　⑷有某些标记基因，便于筛选 ⒉常用运载体： 　 ⑴细菌的质粒 　 ⑵λ噬菌体衍生物或某些动植物病毒 　⑶假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录，转基因生物能有预想的效果吗？ 　⑴作为分子运输车——载体，如果没有切割位点将会怎样？ 　⑵霍乱菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？ 　⑷目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？ 载体：质粒（常用的）、噬菌体的衍生物、动植物病毒 什么是质粒，它作为运载体的条件是什么？ 3、质粒的特点: 质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外,并具有自我复制能力的双链环状DNA分子 4、是不是所有的质粒都可以用作运载体？ 不是。天然的质粒不能用作运载体,作为运载体都是人工改造过的. 随堂练习： 1、关于限制酶的说法中，正确的是（ ） A、限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序列 B、EcoRI切割的是G—A之间的氢键 C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA D．限制酶只存在于原核生物中 C 通过长期的进化，细菌中含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列；或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。 2. （多选）有关基因工程的叙述中，错误的是 A、基因工程技术能定向地改造生物的遗传 性状，培育生物新品种 B、重组DNA的形成在细胞内完成 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、质粒都可作为运载体 BD 提供的物品： 剪刀、针线、载体--环状DNA、 一种含有目的基因的DNA片段、 另一种生物体的体细胞。 提示：剪刀、针线无情，请小心。 以大肠杆菌细胞内获得得ECOR1为例 限制酶的作用：能识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且准确地在每一条中特定部位的两个核苷酸之间切割。 （一）限制性核酸内切酶 分子手术刀 二、DNA重组技术的基工具 （一）限制性核酸内切酶 分子手术刀 A T G G C A T C T T C G A A 磷酸二酯键： 即脱氧核糖、磷酸之间的连接 中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 黏性末端 平末端 （一）限制性核酸内切酶 分子手术刀 （三）基因进入受体细胞的载体 分子运输车 具备哪些条件才能充当“分子运输车”？ 1、外源DNA片段怎样才能插入载体呢？ 2、插入载体的DNA片段怎样才能确保自己在受 体细胞分裂时不被丢失从而稳定地存在于子 细胞内？ 3、目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？ 4、如果载体对受体细胞有害将怎样？ 1、载体必须具备的条件： A、具有多个限制酶切点，以便与外源基因插 入其中； B、具有特殊的遗传标记基因，便于进行筛选。 C、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； D、对受体细胞无害 （双链DNA分子、载体DNA分子大小应合适等。） （三）基因进入受体细胞的载体 分子运输车 （三）基因进入受体细胞的载体 分子运输车 能复制并带着插入的目的基因一起复制 有切割位点 标记基因将来可用含青霉素的培养基鉴别。 2、基因工程中通常利用质粒作为载体 质粒是一种裸露的、结构简单独立于细菌染色体之外、具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 3、载体种类： 除质粒外，还有入噬菌体的衍生物、动植物病毒等 （三）基因进入受体细胞的载体 分子运输车 （二）DNA连接酶 分子缝合针 2、作用部位：磷酸二酯键 G A A T T C C T T A A G G P A P 1、作用：把两条双链 之间的缝隙“缝合”起来。 DNA片段 要实现目的基因与载体的连接则在对其切割时应选用同一种限制酶。 1、用DNA连接酶连接两个相同的黏性末端要连接几个磷酸二酯键？用限制性内切酶切一个特定基因要切断几个磷酸二酯键？ （二）DNA连接酶 分子缝合针 二、DNA重组技术的基工具 根据酶的来