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免疫标记的应用与评价 上海交通大学 瑞金临床医学院 免疫标记的应用 干细胞的确定CD34/CD38/CD90 HPC/PBSC定量分析 1.移植治疗的日益普及 2.移植门槛的降低 3.干细胞采集的确定 4.有效干细胞的确定要求(CD34、CD90、CD38等) CD34+的分析： 未动员前外周血中CD34+细胞1～4%，CD34+/CD38-细胞1/2500，CD34+/CD38-/CD90+细胞1/10000。 各家单抗不同、操作不一，结果难以比较。 内毒素、单纯化疗（骨髓抑制）、细胞因子、化疗联合细胞因子 等的动员。 淋巴细胞和NK细胞确定和定量分析 淋巴细胞分化增殖异常的信号 淋巴细胞与髓系细胞的鉴别 混合性白血病和未确定性(型)白血病的诊断 造血干细胞病变的信号 疾病的预后判断 ??? T细胞标记 T细胞及其亚群 T祖细胞（pro-T）的表型为CD34+、TdT+、CD10+、CD7+、未成熟T细胞标志CD3、CD4和CD8。在T细胞发育过程中，CD7是最早出现的T细胞标志，且贯穿表达在整个T细胞分化发育过程中。胸腺细胞要分化发育为有功能的成熟T细胞，细胞表面标志需经历一定的变化过程。 从CD7+、CD2-、CD3-、CD4-、CD8-、TCR-→CD7+、CD2+、CD3+、CD4-、CD8-、TCR-（即CD4、CD8双阴性）→CD7+、CD1+、CD2+、CD3+、CD4+、CD8+、TCR+（即CD4、CD8双阳性），最后发育成CD7+、CD2+、CD3+、CD4+、CD8-、TCR+和CD7+、CD2+、CD3+、CD4-、CD8+、TCR+单阳性的两群成熟胸腺细胞，然后进入外周淋巴器官和血液，执行免疫功能。 但在正常外周血中通常存在CD3+、CD4+、CD8-（TH/TI），CD3+、CD4-、CD8+（TS/TC），CD3+ CD4+ CD8+和CD3+ CD4- CD8-四种表型不同的T细胞，它们分别占T细胞总数的60%~70%，20%~30%，1%~3%，1%~10%。前三种表型细胞的TCR主要为TCRαβ，而CD4- CD8- T细胞主要表达TCRγδ，他们都执行细胞免疫功能。 CD2是绵羊红细胞受体和淋巴细胞功能相关抗原-2（LFA-2），表达于人95%T细胞、50%～70％胸腺细胞和大颗粒淋巴细胞（LGL／NK）的表面。CD3是T细胞表面抗原，表达于成熟胸腺细胞、静息和激活的的外周血T细胞，是鉴定T细胞的重要标志，其胞浆和膜CD3是早期和普通型T细胞白血病的主要分型标记。 CD5、CD7是T细胞白血病较特异的标记，也是髓系白血病时最常见的伴随标记。CD15、CD45则是白细胞的共同标记抗体，在淋巴瘤的诊断中有一定的价值。而CD25和CD28主要分布于活化T淋巴细胞表面，为活化T淋巴细胞标志。胸腺细胞、静止T细胞、静止B细胞以及NK细胞表面无表达。主要用于淋巴细胞疾病的免疫分型。外周血淋巴细胞CD25+、CD28+占54%～86% 末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）和II类人类白细胞抗原（HLA-DR）的阳性表达对早期T细胞白血病的诊断有重要价值。TCRα、β、γ的基因重排检测有利于恶性T细胞疾病细胞异常克隆存在的确定。 另外，80％～90％和95％以上的NK细胞表达CD16和CD56。用CD3-CD16+CD56+可定义NK细胞。 B细胞标记 B细胞 B细胞的分化主要分为B祖细胞、前B细胞、未成熟B细胞、成熟B细胞、活化B细胞和浆细胞6个阶段。 （1）B祖细胞（pro-B）：此期最早识别的B细胞特异性抗原是CD19，同时表达CD34、细胞核TdT、HLA-DR、CD40、CyCD22。 （2）前B细胞（pre-B）：CD34和TdT消失，出现CyCD79、CD10、CD20、CD9、CDw78、CD74，cμ+（胞浆IgM重链）。 （3）未成熟（早期）B细胞（immature B cell）：CD9、CD10消失，出现 SIgM、CD22。CD20、CD24、CD40、CD72、CD74、CDw78、CD79表达增加。其他新的B抗原CD37、CD2、CDw75、CDw76相继出现。 （4）成熟B细胞（mature B cell）：SIgM和IgD同时表达，并出现CR、FcR和丝裂原受体，上述B细胞抗原继续存在。 （5）活化B细胞（activated B cell）：成熟B细胞被抗原或丝裂原刺激后，成为活化B细胞，继之增生和分化。在此过程伴随表达B细胞激活抗原CD23、CD77、CD80、