运动和黄芪丹参对大鼠骨骼肌线粒体生物发生的作用.docVIP

运动和黄芪丹参对大鼠骨骼肌线粒体生物发生的作用 【摘要】：线粒体是真核细胞内的能量转换器，不仅通过氧化磷酸化生成ATP、在细胞能量供给中起决定性作用，还在生长发育、凋亡、衰老过程中起重要作用。线粒体的生物发生主要指在一个细胞的生命周期中线粒体的增殖、系统发生和个体发生过程。线粒体DNA(mtDNA)位于线粒体基质，是由16569bp组成的双链、闭环结构，含37个基因，编码13条多肽链，22种tRNA和2种rRNA，但这些只能编码线粒体产生与合成所需蛋白总量的一小部分，其余蛋白仍需核基因组编码。因此，线粒体生物发生需要核与线粒体基因组的共同表达。目前有大量研究表明运动可促进线粒体生物发生，但其分子机制仍不完全清楚。以H_2O_2为主的ROS作为第二信使可以调节多种信号转导通路和多种因子的作用，因此研究运动过程中产生的适量ROS是否作为第二信使诱导线粒体生物发生，是否是骨骼肌耐力运动适应、运动能力提高、骨骼肌线粒体增殖的生化基础；以及这一基础是否是临床应用黄芪丹参治疗骨骼肌损伤和促疲劳恢复的治疗机制都有重要的现实意义。本研究的目的在于：(1)探讨一次急性运动及耐力运动后线粒体生物发生相关因子的时相性变化，线粒体形态及酶学变化，以及在运动诱发线粒体生物发生过程中对PKB／Akt信号转导通路的影响情况。(2)探讨过氧化氢对原代培养骨骼肌细胞存活状态的影响，探索过氧化氢在不同剂量及作用时间对线粒体生物发生相关因子的影响，确定其体外最适作用剂量和体外最适作用时间(可激发线粒体生物发生，又不至引发细胞死亡)，从而了解以过氧化氢为主的ROS对线粒体生物发生相关因子的作用机制。(3)探讨黄芪丹参和／或游泳耐力训练在诱导线粒体生物发生过程中的作用，研究黄芪丹参促进骨骼肌损伤修复、抗疲劳的分子生物学机制。本研究共分三个部分，研究方法及结论如下。一、运动对大鼠骨骼肌线粒体生物发生机制的影响方法：1、一次急性运动组选用雄性SD大鼠42只，随机分为7组：对照组(C1组)6只；运动即刻组(0h组)6只；一次运动后3小时组(3h组)6只；一次运动后6小时组(6h组)6只；一次运动后12小时组(12h组)6只；一次运动后18小时组(18h组)6只；一次运动后24小时组(24h组)6只。所有训练组进行2天适应性游泳，每天一次，每次10min；以后每次游3小时，每天2次(共计6小时为一次长时游泳运动)，中间间隔45分钟。2、耐力训练组选用雄性SD大鼠42只，随机分为7组：对照组(C2组)6只；6周最后一次运动后即刻组(OH组)6只；6周最后一次运动后3小时组(3H组)6只；6周最后一次运动后6小时组(6H组)6只；6周最后一次运动后12小时组(12H组)6只；6周最后一次运动后18小时组(18H组)6只；6周最后一次运动后24小时组(24H组)6只。所有训练组2天适应性游泳，每天一次，每次10min；以后前4周每次游40min，每天1次；后2周每次游60min，每天1次，共游泳6周。急性及耐力运动结束后，分别取各大鼠腓肠肌，检测线粒体酶复合体(complexⅣ，COX)、一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase，NOS)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)活性；电镜检测骨骼肌线粒体；采用SYBRGreen逆转录实时荧光定量PCR方法测定各组大鼠骨骼肌过氧化体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(Peroxisomeproliferator-activatedreceptor-gammacoactivator-1，PGC-1α)、线粒体转录因子A(mitochondrialtranscriptionalfactor-A，mtTFA)、线粒体转录因子B2(mitochondrialtranscriptionalfactor-B2，mtTFB2)、核呼吸因子-1(nuclearrespiratoryfactohNRF-1)mRNA表达水平；Western-blotting方法检测Phospho-Akt(Ser473)水平。结果：1、一次急性运动后同安静组比较：骨骼肌线粒体COX活性在运动后即刻、运动后3h、6h组明显升高；NOS活性在运动后6h、12h、18h、24h组明显升高；SOD活性在运动后即刻、3h、6h、12h组明显升高。电镜结果表明，对照组肌原纤维间有大量骨骼肌线粒体，形态完整，嵴紧密且整齐。一次急性运动后组线粒体多大量堆积于细胞核周围和肌纤维间，形态多样，多数线粒体肿胀成球形，体积增加(以一次急性运动后0h和24h组为例)，嵴融合，线粒体中间形成很多大的空隙，类似鬼影状。一次急性运动后骨骼肌PGC-1αmRNA在6h、12h组明显增加；mtTFAmRNA水平在12h、18h、24h组明显升高；mtTFB2mRNA水平在1