酸乳中有机酸的测定方法修改后（王严严）.docVIP

辽宁经济管理干部学院 辽宁经济职业技术学院 毕 业 论 文 题 目 酸乳中有机酸的测定方法 姓 名 王严严 所在系部 生物工程系 专业班级 食品生物技术 学 号 201001881 指导教师 陈伟 日 期 2010年 4 月 13 日  酸乳中有机酸的测定方法 10食品班 王严严 指导老师 陈伟 摘要：有机酸是酸乳中的重要指标。对有机酸的研究，不仅可以了解发酵的代谢背景，调控有机酸的产生，同时也对评价酸乳的营养价值、12感风味和研究其生理功能有重要作用。简要介绍酸乳中有机酸分离与定量的毛细管电泳法、离子色谱法、气相色谱法以及高效液相色谱法的步骤及其优缺点。 关键词：酸乳；有机酸检测；毛细管电泳；离子色谱；气相色谱；高效液相色谱 酸乳中有机酸的简介 有机酸是酸乳中重要的因素[l]，它具有抑菌、抗病毒、增加冠脉流量、抑制脑组织脂质过氧化物生成、消炎、抗突变和抗癌等作用固，许多有机酸都具有生理活性嘲。有机酸不仅是酸乳发酵程度的重要指标，也是酸乳的主要风味营养物质之一和天然防腐剂，其含量高低与酸乳的品质有密切关系 ，确定酸乳及其发酵过程中的有机酸种类以及含量，不仅有助于了解酸乳发酵的代谢背景，进一步代谢控制某些有机酸的产生，也对评价酸乳的营养价值、口感风味和研究其生物功能都起到重要作用 1 . 酸乳中有机酸的分离与定量方法 测定发酵产品中有机酸的方法包括硅胶色谱法、有机酸自动分析法、纸色谱法、薄层层析法(TLC)、毛细管电泳法、离子色谱法、气固或气液色谱法(GSC或GLc)以及高效液相色谱法(HPLC)等。硅胶色谱法制备柱子要求高操作复杂。纸色谱法及薄层层析法(TLC)只是定性和半定量分析，且需要冗长的富集、浓缩、皂化等许多预处理步骤，操作十分复杂，故实际应用不多。目前毛细管电泳法、离子交换色谱法、气相色谱法和高效液相色谱法是最精确和直接的方法。 1.1毛细管电泳法(Capillary Electrophoresis，CE) 毛细管电泳法是以弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的电泳分离分析方法。毛细管电泳所用的石英毛细管柱，PH值大于3的情况下，其内表面带负电，与缓冲液接触时形成双电层，在高压电场的作用下，形成双层一侧的缓冲液由于带正电而向负极方向移动，从而形成电渗流。同时，在缓冲溶液中，带电粒子在电场作用下，以各自不同速度向其所带电荷极性相反方向移动，形成电泳。带电粒子在毛细管缓冲液中的迁移的速度等于电泳和电渗流的矢量和。各种粒子由于所带电荷多少、质量、体积以及形状不同等因素引起迁移速度不同而实现分离。该方法前处理简单，分析时间短，灵敏度高，且可以实现大量样品的快速测定，由于毛细管的管径细小、散热快，即使是高的电场和温度，都不会向常规凝胶电泳那样使胶变性，影响分辨率。在实验中可采用毛细管区带电泳法进行检测，准确定量发酵初期以及目标产物中的有机酸[6]。其分离模式有毛细管区电泳、毛细管凝胶电泳、胶束电动毛细管色谱、亲和毛细管电泳、毛细管电色谱、毛细管等电聚焦电泳、毛细管等速电泳，其中以前三中应用较为广泛。 原理：是根据在电场作用下离子迁移的速度不同而对组分进行分离和分析，在高压电场的作用下，根据在缓冲液中各组分之间迁移速度和分配行为上的差异，等因素引起迁移速度不同而实现分离；在毛细管靠负极的一端开一个视窗，可用各种检测器。 步骤：(1)样品制备：将样品离心过滤等预处理，除去菌体及蛋白大分子。(2)进行全波长范围扫描，选择所测有机酸都有吸收的波长。(3)选有机酸迁移时间短，峰形及区带合适的操作电压。(4)选分离有机酸效果好的磷酸缓冲液浓度。(5)有机酸为弱酸，其p Ka值大多在2～6之间，因此有机酸的有效迁移率的大小在很大程度上取决于缓冲液的pH值，选有机酸分离效果理想的pH值。(6)将样液在优化的实验条件下直接进样。(7)加入标准品对比，可检测到样品中有机酸含量。 说明：电极槽和毛细管内的溶液为缓冲液，可以加入有机溶剂作为改性剂，以及加入表面活性剂，称作运行缓冲液。运行缓冲液使用前应脱气。电泳谱中各成分的出峰时间称迁移时间。胶束电动毛细管色谱中的胶束相当于液相色谱的固定相，但它在毛细管内随电渗流迁移，故容量因子为无穷大的成分最终也随胶束流出。其他各种参数都与液相色谱所用的相同。 1．2 离子色谱法(Ion Chromatography，IC1Ic 离子色谱的工作原理就是离子交换平衡，离子色谱中使用的固定相是离子交换树脂。离子交换树脂上分布有固定的电