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醋五味子检验方法验证方案 一、简介 醋五味子 取净五味子，照醋蒸法蒸至黑色，用时捣碎。主要用于肺虚久咳，肺热痰嗽，久泻久痢，自汗盗汗，消渴，便血痔血，外伤出血，痈肿疮毒，皮肤湿烂。 二、验证目的： 醋五味子检验质量标准收载在《中国药典》2010版一部P61, 为保证生产出的成品符合检验标准的要求,确认该检测方法是否适用于本公司生产的成品检验。现对质量标准分析方法进行验证，确保检验结果的准确可靠。 三、验证范围 ①、鉴别 ②、含量测定 四、验证小组成员及职责 4.1验证小组成员 4.2人员职责 人员职责 验证小组组长 组织相关的验证培训；负责起草验证方案、组织项目的具体验证、督促验证小组成员按照验证方案的要求做好验证记录；起草并完成验证报告，对整个验证项目负责。 验证小组成员 按照方案实施验证、并做好记录、意外情况及时汇报和记录、协助起草验证方案和报告。 表1： 五、验证实施步骤 1、为了确保验证数据的准确可靠，采取以下几个先行保障措施 1.1仪器：己经过校正并在有效期内 1.2人员：均经过培训，熟悉方法及使用的仪器 1.3对照品：均购自江苏省药品检验所 1.4材料：均符合检验要求 1.5参考资料： 《中国药典》2010年版一部 《药品生产验证指南》(2003版) 2、鉴别 2.1试验A：取本品粉末lg，加三氯甲烷20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材lg，同法制成对照药材溶液。再取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254，薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颇色的斑点。 2.2 试验B：取三氯甲烷20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。取试验A下的对照药材溶液及对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254，薄层板上，以石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。 2.3检测结果: 表2 检验结果 结果判断 试验A 试验B 检测人: 检测日期: 2.4 验证标准:试验A供试品溶液在与对照药材溶液及对照品溶液相同的位置显相同颜色的斑点。试验B供试品溶液在与对照品溶液相同的位置未显斑点。 2.5检验结果评价 3、含量测定 照高效液相色谱法测定。 仪器：LC-10AT液相色谱仪 3.1专属性 3.1.1色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇水(65：35)为流动相；检测波长为250nm。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。流速：1.0ml/min；色谱柱规格：4.6×250mm；粒度：5μm；进样量：10μl。 3.1.2对照品溶液的制备：精密称取在五氧化二磷减压干燥器中存放过夜的五味子醇甲对照品约15mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为五味子醇甲对照品溶液。 3.1.3供试品溶液的制备：取本品粉末（过三号筛）约0.3g，置25ml量瓶中，加甲醇约20ml，超声处理（功率250W，频率20kHz）20分钟，取出，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 3.1.4空白溶液的制备： 直接取甲醇作为空白溶液。 3.1.5将结果填入下表。 表3 含量测定专属性试验表 保留时间 供试品溶液 对照品溶液 空白溶液 检测人： 检测日期： 3.1.6验证标准：供试品溶液中应呈现与五味子醇甲对照品保留时间相同的色谱峰；空白溶液中在这点应无色谱峰。 3.1.7结果评价 3.2线性及线性范围 3.2.1色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水 (65：35)为流动相；检测波长为250nm。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。流速：1.0ml/min；色谱柱规格：4.6×250mm；粒度：5μm；进样量：10μl。 3.2.2对照品溶液的制备：取3.1.2项下的对照品溶液作为对照品溶液。 3.2.3标准曲线的制备：分别吸取3.2.2项下对照品溶液0.4ml、0.8ml、1.2ml、1.6ml、2.0ml置5个2ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成分别约含五味子醇甲0.