雪莲注射液细菌内毒素检查方法研究.docVIP

雪莲注射液细菌内毒素检查法的研究 作者： 王雪峰 阿丽米热.艾塔木 王平 　　【摘要】目的 研究雪莲注射液细菌内毒素检查BET的干扰实验，寻求使用鲎试剂检测雪莲注射液中细菌内毒素的方法。方法 按照《中国药典》2010年版二部收载的细菌内毒素检查方法进行试验。结果： 当样品作80倍稀释时，用标示灵敏度为0.5EU/ml鲎试剂检测细菌内毒素检查，雪莲注射液对鲎试剂的凝集反应未见干扰作用，测试结果均符合规定。结论： 可以用细菌内毒素检查法来控制雪莲注射液的质量。 　　【关键词】雪莲注射液； 细菌内毒素 　　雪莲注射液为菊科植物天山雪莲花 Saussurea involucrata Kar. et Kir.的干燥地上部分经提取制成的灭菌水溶液。主要有消炎镇痛，消肿，活血化瘀作用。用于急、慢性风湿性关节炎，类风湿性关节炎及骨关节炎引起的关节疼痛等症。雪莲注射液作为注射剂应检查细菌内毒素来确保质量. 本实验探讨以细菌内毒素检查法检测雪莲注射液的可行性. 　　1 试药与仪器 1.1 试药：鲎试剂（TAL），灵敏度0.5 EU/ml，规格0.1 ml/支，批号0907311，湛江安度斯生物有限公司。鲎试剂（TAL），灵敏度0.5 EU/ml，规格0.1 ml/支，批号090303,广西北海市兴龙生物制品有限公司。细菌内毒素工作标准品，100EU/支，批号2007-5， 中国药品生物制品检定所。细菌内毒素检查用水（BET水），2 ml/支，批号0907300，湛江安度斯生物有限公司。 雪莲注射液 ：2 ml/支，批号091103，091105，090910， 国药集团新疆制药有限公司。 　　1.2 仪器：电热恒温水浴箱（北京永光明医疗仪器厂）；旋涡混合器（江苏海门其林医用仪器厂）。实验用玻璃器皿经250℃烘烤1h以上。 　　2 方法与结果 2.1 样品：细菌内毒素限值确定根据L=K/M，其中K=5EU/(kg.h)，它是细菌内毒素的致热阈；M为本品每公斤每小时的最大供试品剂量，雪莲注射液每次最大剂量4ml/次；按《中国药典》2010年版Ⅱ部附录：细菌内毒素检查法， M＝4ml/60(Kg.h)＝0.067ml/Kg.h故L=K/M=5/0.067=75EU/ml。 　　2.2 样品最大有效稀释倍数的确定TAL常用灵敏度（λ）在0.5 EU/ml时，根据MVD= Lc/λ得MVD为150倍. 2.3 TAL灵敏度复核实验按《中国药典》2010年版Ⅱ部附录操作，对标示灵敏度为0.5 EU/ml的两批TAL进行复核。结果见表1。 TAL批号：0907311 内毒素浓度EU/ml 1.0 0.5 0.25 0.125 Nc 反应终点浓度EU/ml 重 复 管 数 1 ＋ ＋ － － － 0.5 2 ＋ ＋ － － － 0.5 3 ＋ ＋ － － － 0.5 4 ＋ － － － － 1.0 TAL批号：090303 内毒素浓度EU/ml 1.0 0.5 0.25 0.125 Nc 反应终点浓度EU/ml 重 复 管 数 1 ＋ ＋ － － － 0.5 2 ＋ ＋ － － － 0.5 3 ＋ ＋ － － － 0.5 4 ＋ － － － － 1.0 结果：λc1＝lg-1(∑×/4)＝lg-1【(lg0.5＋lg0.5＋lg0.5＋lg1.0) /4】＝0.59 EU/ml λc2＝lg-1(∑×/4)＝lg-1【(lg0.5＋lg0.5＋lg0.5＋lg1.0) /4】＝0.59 EU/ml 表1结果表明: TAL灵敏度复核结果λc均在0.5～2.0 λ（即0.25～1.0 EU/ml）之间，符合规定，可用于实验。 2.4 样品干扰预实验为排除雪莲注射液本身对TAL与细菌内毒素凝胶反应可能存在的干扰，分别取供试品原液和1∶10，1∶20，1：30，1：40，1：50，1：60，1：70，1：80，1：90，1：100，1：110，1：120稀释液，将细菌内毒素工作标准品稀释成2λ（1.0 EU/ml）浓度，用λ=0.5 EU/ml的TAL进行实验，同时做阳性和阴性对照。结果见表2。 雪莲注射液：090910 干扰预试验结果 稀释倍数1： 原液 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 供试品溶液 ―― ―― ―― ―― ―― ―― ―― ―― ―― ―― ―― ―― ―― 供试品阳性对照 ―― ―― ―― ―― ―― ―― ―― ―― ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋ 阳性对照 ＋＋ 阴性对照 ―― 雪莲注射液： 091103 干扰预试验结果 稀释倍数1： 原液