骨髓细胞学检测的标准操作程序(SOP).doc

骨髓细胞学检测的标准操作程序(SOP) 实验室名称 项 目 编 号 制定日期 ****** 骨髓细胞学检测 ****** ****年**月**日 【目的】 指导骨髓细胞学检测的测定。 【该SOP变动程序】 本标准操作程序的改动可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、质控主管、科主任。 【检验的适应证】 1.诊断造血系统疾病； 2.协助诊断某些疾病； 3提高某些疾病的诊断率。 【仪器与试剂】 1.仪器：光学显微镜。 2.试剂：瑞氏-姬姆萨复合染色液 Ⅰ液：取瑞氏染粉1g、姬姆萨染粉0.3g，置洁净研钵中，加少量甲醇（分析纯）研磨片刻，吸出上层染液，再加少量甲醇继续研磨，如此连续几次，共用甲醇500ml，收集于棕色玻璃瓶中，每天早、晚各振摇3分钟，共5天，再存放一周即可使用。 Ⅱ液：PH6.4-6.8磷酸盐缓冲液 磷酸二氢钾（无水）6.64g 磷酸氢二钠（无水）2.56g 加少量蒸溜水溶解，用磷酸盐调整PH，加水至1000ml. 【操作程序】 1.骨髓取材：由临床医生取材、涂片。 2.髓片编号、登记。 3.染色程序： [1] 髓片两端用蜡笔画线，置染色架上。 [2] 加Ⅰ液染液3-5滴于涂片上，静止1分钟（天热时间可缩短）。 [3] 然后加Ⅱ液磷酸盐缓冲液3-10滴，使两液混匀，约10-15分钟。 [4] 用水缓缓冲洗髓片，待干镜检。 4.普通光镜低倍镜检查： [1] 判断髓增生情况：在观察取材、涂片、染色等情况是否满意的基础上，以涂片中有核细胞与成熟红细胞之比来判断骨髓有核细胞的增生程度。 共分五级，判断标准如下： 增生极度活跃：成熟红细胞与有核细胞之比约为1：1，见于白血病、红白血病。 增生明显活跃：成熟红细胞与有核细胞之比约为10：1，见于白血病、增生性贫血。 增生活跃：成熟红细胞与有核细胞之比约为20：1，见于正常骨髓、某些贫血。 增生减低：成熟红细胞与有核细胞之比约为50：1，见于造血功能低下。 增生严重减低：成熟红细胞与有核细胞之比约为300：1，见于再生障碍性贫血。 判断的原则：当检验的结果介于两级之间时，则将其增生程度向上提一级。 [2] 估计巨核细胞系统增生情况：计数全部片膜内的巨核细胞。正常人于1.5cmX3cm的范围可见巨核细胞7-35个。但须在油镜下观察得以证实。 [3] 观察涂片边缘、尾部、骨髓小粒周围，有无体积较大或成堆分布的异常细胞，但也须在油镜下观察得以证实。 5.油镜检查： [1] 选择满意的片膜段，观察200-500个细胞，按细胞的种类、发育阶段分别计数，并计算它们各自的百分率。 [2] 各阶段血细胞的形态学特征。（略） [3] 观察各系统的增生程度和各阶段细胞质量和数量的变化，观察的要点： 1] 粒细胞系统：观察胞体的大小、胞核的形态以及胞浆是否有空泡和变性、中毒性颗粒、Auer小体、吞噬物等。 2] 红细胞系统：观察幼红细胞有无巨幼样变，胞核有无固缩、碎裂、胞浆内有无嗜碱性点彩、H0well-Jolly小体、Cabot环等，并应同时观察成熟红细胞大小、形态、染色、结构等有无异常。 3] 巨核系统：除作分类计数外，应注意巨核细胞和血小板的数量、大小、形态、及聚集性、颗粒变化等。 4] 单核细胞、淋巴细胞、浆细胞、网状细胞、内皮细胞、组织嗜碱细胞、吞噬细胞的数量和形态变化。 5] 是否出现其它异常细胞和血液寄生虫等。 6.结果计算： [1] 计算各系统各阶段细胞分别占有核细胞的百分率。 [2] 计算粒红比例，将各阶段粒细胞百分率的总和与各阶段有核红细胞百分率的总和作比 较，计算粒红比值（G/E）。 7.血象分析：分析骨髓象必须分析血象，因为两者可以互相对照，以增加诊断的正确性。 8.细胞化学染色：用以协助鉴别诊断，常用的染色方法： 过氧化物酶染色、过碘酸-雪夫反应（糖原染色）、碱性磷酸酶染色、氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色、醋酸AS-D萘酚酯酶染色和氟化钠抑制试验、酸性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶 染色、铁染色。 9.填写检验报告单 [1] 取材、涂片、染色等情况：采用“良好”、 “尚可”、 “不佳” 三级评价标准。 1] 取材良好的指标：骨髓液和涂片上均有骨髓小粒和脂肪滴。有造血的幼稚细胞的巨核细胞，有骨髓特有的细胞，粒细胞的杆状核与分叶核的比值大于血片中的比值。 2] 涂片良好的指标：片膜厚薄适当、均匀，有头、体、尾三部分；尾部成弧形，上下缘整齐；面积约1.5cmX3cm；镜下见各类有核细胞分布均匀，成熟红细胞互不重叠，也不分散，也不皱缩。 3] 染色良好的指标：片上无染料沉着，细胞染色均匀，深浅适当，色泽鲜明，颜色正确。成熟红细胞染浅红色，粒细胞核分叶清楚，核染色质及胞浆颗粒清楚。 [2] 填写检验报告单：根据检验的结果，按报告单的要求，每项详细填写和描述。