（三）早期胚胎的体外培养（ivc）1、培养液基本成分主要.pptVIP

（三）早期胚胎的体外培养（IVC） 1、培养液：基本成分主要包括无机盐、氨基酸、维生素、碳水化合物和蛋白质等。 2、胚胎体外培养系统：常规培养系统、输卵管离体培养系统、与体细胞共培养系统。 3．培养方法：卵子在受精24h后，转移到预先制备好的颗粒单层中继续培养。一般使用微滴培养法。 4、培养的温度和气相环境：和卵母细胞成熟的条件一样。 5．胚胎的回收及其质量评定：以牛为例，整个体外受精程序，从卵母细胞成熟培养开始，经过体外受精和体外培养直至受精卵发育到囊胚阶段，一共经历8d的时间。如定受精当天为0d，则受精后第5～6d即可回收桑椹胚，第7～8d回收囊胚。  三、家畜体外受精技术的发展现状和存在的问题 （一）发展现状 （二）存在的问题和发展方向 1、存在的问题 １）囊胚发育率低，细胞数少。 ２）产仔率低，胎儿初生重高。 2、发展的方向 １）深入研究卵母细胞成熟和胚胎发育的分子机理； ２）加强腔前卵泡的培养研究，充分利用优良母畜的遗传资源； ３）加强体外受精与其他生物技术的结合。 四、辅助受精技术 (assisted fertilization) 透明带下注射(Subzonal injection,SUZI) 透明带钻孔(Zona drilling, ZD) 活精子 透明带部分切口(Partial zona dissection, PZD) 卵母细胞质内注射(Intracytoplasmic sperm injection, ICSI) 这些通过对哺乳类配子进行显微操作以协助其受精的技术称为显微受精。 精子显微注射体外受精技术 显微受精技术在动物受精和发育机理研究、畜牧业生产及人医临床实践中有着广阔的应用前景： 精液的利用率可成百万倍的提高，可以使优良种公畜得到最充分的应用； 精子的保存技术将大为简化，将来或许只要精子核物质完整就可以达到受精的目的，这对世界珍稀动物资源的保护将产生深远的影响； 与其他技术结合，如将已经过性别鉴定的精子注入卵子受精，可人为控制家畜后代的性别。 第三节 克隆 技术Animal cloning 一、概述 二、胚胎分割 三、单个卵裂球分离培养 四、细胞核移植 一、概述 “克隆”的定义 动物克隆：是指由一个动物经无性繁殖（asexual reproduction）或孤雌生殖而产生的多个具有与亲本相同遗传信息的同质性后代，包括孤雌激活生殖、卵裂球分离与培养、胚胎分割以及核移植等。 胚胎分割：人为的将早期胚胎分割成两个或几个，然后移植给受体母畜可以获得一卵双胎甚至多胎。 根据供体细胞核的来源分为：胚胎细胞克隆和体细胞克隆 二、牛胚胎分割 三、卵裂球培养示意图 四、细胞核移植（nuclear transplantation or nuclear transfer，NT，记忆）：核移植（nuclear transplantation or nuclear transfer, NT），也称作细胞核移植，是指将一个核供体通过显微操作方法移植到一个核受体中，组成核质杂合细胞，这种核质杂合细胞也叫作重构胚。 核供体：①初期胚胎细胞； ②ES细胞； ③各种体细胞：如胎儿成纤维细胞，乳腺细胞，皮肤细胞（耳、成体、胎儿），肌肉细胞，卵丘细胞，内脏细胞（肝、脾、心、肺、肠、舌）； ④生殖系列细胞：PGCs、精母细胞、足细胞和精巢细胞。 核受体： ①去核卵母细胞； ②去核合子； ③去核2-细胞期胚胎的卵裂球。 （一）动物克隆研究的历史和现状 体细胞克隆首例 动物核移植技术程序 * * 1--cell 2--cell 4--8cell 桑椹胚 囊胚 体外受精 体外培养 ５０％ － ６０％－７０％ ９０％ 猪 ５０％ ８０％ ３０％－４０％ ８０％－９０％ 羊 ３０％－４０％ ８０％ ４０％－５０％ ８０％－９０％ 牛 鲜胚移植后的产仔率 冷冻后存活率 囊胚率 卵裂率 动物 Intracytoplasmic Sperm Injection: ICSI 二、囊胚的分割（续） 胚胎细胞核移植 体细胞核移植 细胞核移植的方法 * * *