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青海大学医院 2009级普通外科临床医学硕士学位毕业论文答辩 2012年5月15日 研究生简介 ★张鹏，男，山西省临汾市人，1984年10月出生，中共党员。2009年本科毕业于长治医学院，同年考入青海大学医学院，攻读肝胆胰疾病专业临床医学硕士学位。在校期间各科成绩均达75分以上，CET6级达到国家线并通过执业医师资格考试。撰写论文《红景天苷对缺血再灌注损伤作用的研究进展》发表于《中华临床医师杂志》2012年第1期。 红景天苷预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用The protective effect of salidroside preconditioning on hepatic ischemia-reperfusion injury in rats 学 生：张 鹏 指导老师：邓 勇 教 授 樊海宁 教 授 王海久 教 授 ★研究背景 ★目的及意义 ★材料与方法 ★结 果 ★讨 论 ★结 论 ★致 谢 主 要 内 容 研究背景 ★ 良好的血液灌注是组织和器官获得充足氧和营 养物质供应并排出代谢产物的基本保证，各种原因造成的的组织和器官血液灌注量的减少均可使细胞发生缺血性损伤。因此尽快恢复组织和器官的血流灌注就成为了减轻缺血性损伤的根本措施。但是在临床观察和动物实验中发现，恢复血流再灌注后，部分动物和患者器官功能代谢障碍及结构破坏反而进一步加剧，因此提出了缺血-再灌注损伤(ischemia reperfusion injury IRI)的概念。 ★ 肝脏缺血再灌注( I / R) 损伤是伴随肝移 植术和肝切除术发展的一个重要临床问题，也是手术失败的主要原因之一。因此如何降低或避免肝脏缺血-再灌注损伤就成了备受关注的热点之一。 研究背景 研究背景 ★ 红景天苷是红景天的主要活性成分，其 抗辐射、抗缺氧、抗疲劳、抗衰老的功 效已得到较遍的认同。近些年来的研究证明红景天苷对缺血再灌注损伤也有一定保护作用，并在心脏、脑、肾等缺血再灌注损伤模型中得到了证实，主要是通过对氧自由基、钙超载、中性粒细胞、细胞因子、细胞凋亡等几个方面的作用来实现。但其对肝脏缺血再灌注损伤是否具有相同的作用却鲜有报道。 研究目的及意义 ★本实验通过红景天苷预处理对大鼠肝缺血-再灌注损伤作用的研究，进一步明确红景天苷在肝脏缺血-再灌注损伤中的作用。 ★为红景天苷的进一步临床应用提供实验依据，也为缺血性疾病提供新的预防和治疗措施。 材料与方法 ★研究对象： 1.健康SD大鼠72只，雌雄各 半体重278.7±16.6g/只， 由兰州大学实验动物中心提 供。 2.红景天苷（纯度98%以上） 购于西安开来生物工程有限公 司。 ★主要试剂： 均购自北京中杉金桥生物有限公司，实验过程中严格按照试剂说明书进行操作。 材料与方法 HSP70抗体及稀释液 DAB及底物液 二抗试剂（3%H2O2去离子水；聚合物辅助剂；辣根酶标记抗小鼠IgG多聚体） 材料与方法 ★主要仪器：由青海省肿瘤医院病理科、青海大学附属医院肝胆胰二科实验室及检验科提供。 分体式石蜡包埋机 手动轮转式切片机 隔水式恒温水浴箱 半封闭生物脱水机 全自动染色仪 全自动生物显微镜 材料与方法 ★实验分组：将72只SD大鼠随机分为四组 A组：假手术组，开腹仅分离门静脉，作为对照组。 B组：模型组，麻醉成功后做腹部正中切口开腹，分离显露肝门部，剪开左中肝叶韧带，显露并游离大鼠门静脉，用4-0丝线结扎门静脉后关腹。阻断45分钟后开腹拆除结扎线，建立再灌注模型。 C组：红景天苷高剂量预处理组（24mg/Kg）。 D组：红景天苷低剂量预处理组（6mg/Kg）。 材料与方法 ★麻醉方法：20%乌拉坦溶液按0.4ml/100g，腹腔注射 。 ★预处理因素：A、B组在开腹前第5、4、3、2、1天每天每只大鼠腹腔灌注生理盐水1.5ml，C、D组则按高、低剂量腹腔灌注红景天苷与生理盐水混合液1.5ml。 技术路线图 SD大鼠72只 同步化喂养，随机分组，每组18只 对照组 模型组 高剂量组 低剂量组 再灌注1h、6h、8h，A、B、C、D各组处死6只（n=6），留取标本 开腹前第5、4、3、2、1每 天每只腹腔注射1.5ml 肝功能 检测 组织学 病理变化 HSP70表 达测定 统计学处理 材料与方法 ★实验主要步骤： 腹腔麻醉 结扎门静脉 取材 材料与方法 ★肝脏的免疫组化检测HSP70表达：各