第八章 沉淀分离技术.pptVIP

沉淀分离技术 沉淀（precipitation）：在溶液中加入沉淀剂使溶质的溶解度降低，形成固相从溶液中析出，从而达到分离的一种技术。 优点：过程简单、成本低、原料易得、便于小规模生产 缺点：过滤困难、产品质量较低、需重新精制 盐析 有机溶剂沉析 等电点沉析 有机聚合物沉析 其他沉析技术 一 盐析 盐析 沉淀剂：采用盐，硫酸铵 操作范围：饱和度20- 100% 适用于：蛋白质的分离 一、盐析 原理 溶液加入高浓度中性盐后，盐离子与生物分子表面的带相反电荷的离子基团结合，中和了生物分子表面的电荷，降低了生物分子与水分子之间的相互作用，生物分子表面水化膜逐渐被破坏，当盐浓度达到一定的限度时，生物分子之间的排斥力降到很小，此时生物分子很容易相互聚集，在溶液中的溶解度降得很低，从而形成沉淀从溶液中析出。 产生盐析的另一个原因是大量盐离子自身的水合作用降低了自由水的浓度，使生物分子脱去了水化膜，暴露出疏水区域，由于疏水区域的相互作用，使其沉淀析出。 （4）盐析时生物分子浓度要合适，应充分考虑共沉及稀释后收率、盐量和固-液分离等问题。一般低浓度硫酸铵可采用离心分离，高浓度硫酸铵常用过滤方法，因为高浓度硫酸铵密度太大，要使蛋白质完全沉降下来需要较高的离心速率和较长的离心时间。（5）盐析后溶液应进行脱盐，常用的办法有透析、凝胶过滤及超滤等。 （二）应用 有机溶剂沉析技术经常用于蛋白质、酶，多糖和核酸等生物大分子的沉析分离。使用时先要选择合适的有机剂，然后注意调控样品的浓度、温度、pH和离子强度，使之达到最佳的分离效果。沉析所得的固体样品，如果不是立即溶解进行下一步的分离，则应尽可能抽干沉析物，减少其中有机溶剂的含量，如若必要可以装透析袋透析脱除有机溶剂，以免影响样品的生物活性 三、等电点沉析 等电点沉析原理 调节两性生化物质溶液的pH值，以达到某一生化物质的等电点，使其从溶液中沉淀析出而实现分离的技术称为等电点沉析技术。 等电点(pI)是两性物质在其质点的净电荷为零时介质的pH值,溶质净电荷为零，分子间排斥电位降低，吸引力增大，能相互聚集起来，沉淀析出，此时溶质的溶解度最低 * * 影响盐析的因素（p95-96） （一）盐离子浓度 在低盐浓度时，盐离子能增加生物分子表面电荷，使生物分子水合作用增强，具有促进溶解的作用，称盐溶现象。 当盐浓度达一定值后,盐浓度升高，生物分子溶解度不断降低,产生了盐析作用,不同的生物分子，“盐溶”与“盐析”的分界值不同。 （二）生物分子种类 生物分子的分子结构不同，其分子表面亲水基团与疏水基团不相同，不同生物分子产生盐析现象所需中性盐的浓度（离子强度）亦不同。 （三）生物分子浓度 溶液中生物分子的浓度对盐析的效果有很大的影响，要得到理想的沉析效果，必须将生物分子的浓度控制在一定的范围内。一般对于蛋白质溶液，其浓度为2%～3%比较合适。 （四） pH值 在盐析时，如果要沉析某一成分，应将溶液的pH值调整到该成分的等电点，如果希望某一成分保留在溶液中不析出，则应使溶液的pH值偏离该成分的等电点。 （五）温度 多数物质的溶解度会受温度变化的影响。 盐析的操作与应用 （一）盐析的操作 1、盐的处理 硫酸铵使用时要求纯度较高，生产时为降低成本，一般选用化学纯的硫酸铵，在使用前应进行预处理，可通过化学法将重金属除去（如通入H2S后过滤），再将硫酸铵重结晶备用。 2、加盐的方法 （1）直接加入固体硫酸铵法 （2）加入饱和硫酸铵溶液法 3、盐析操作注意事项 （1）盐析反应完全需要一定时间，一般硫酸铵全部加完后，应放置30min以上才可进行固-液分离。 （2）经过一次分级得到的盐析沉淀，能否进行第二次盐析要靠试验确定。 （3）盐析操作时加入盐的纯度、加量、加入方法、搅拌的速度、温度及pH等参数应严格控制。 （二）盐析的主要应用 盐析是最早使用的生化分离技术之一，由于易产生共沉作用，故其分辨率不是很高，但配其他手段完全能达到很好的分离效果。 由于成本低，操作安全简单，对许多生物活性物质具有很好的稳定作用，常用于蛋白质、酶、多肽、多糖、核酸等物质的分离纯化。 二、有机溶剂沉析 原理 （一）亲水性有机溶剂本身的水合作用降低了自由水的浓度，使溶质分子周围的水化层变薄，导致脱水而相互聚集析出，也就是降低了溶质的溶解度。 （二）有机溶剂的介电常数比水小，加入有机溶剂后，整个溶液的介电