残留除草剂的检测.ppt

残留除草剂的检测 报告人：苏晓卉 实验方法 氧电极的内充液为0.5mol/L KCl溶液。首先用空气饱和Na2CO3的蒸馏水和饱和溶液对氧测定仪进行满刻度调节和调零，然后取一片 4mm2 叶绿体固定化膜（或相同叶绿素浓度的叶绿体悬浮液）放入内体积为2mL的反应池中，加入pH＝7.4的Tris-HCl 5×10-3mol/L MgCl2缓冲溶液1.5mL，0.08mol/L H2O2100μL，加水至2mL。插入氧电极，反应池外层通28oC恒温循环水，搅拌反应液3min，从记录仪上读取放氧量P0。更换反应池中的溶液和固定化膜，用微量进样器加入一定量的除草剂，测量P，计算 ? P= P0- P。每次测量都使用新的叶绿体固定膜。测定装置如图1。 影响因素 叶绿体膜的活性 根据测得的PVA-SbQ固定化叶绿体膜催化降解过氧化氢产生氧气的速率来计算膜的活性。本实验采用敌草隆作为样品（以下实验除指明外，均采用敌草隆），结果如图2。由图2可见，保存在-20oC冰箱中的PVA-SbQ固定膜1个月内活性基本没有改变；5个月后，膜活性保留仍超过50％，满足实际测定要求。 校准曲线 按照实验方法分别测定了不同浓度范围的阿特拉津、莠灭净、草净津、西玛三嗪、扑草净、敌草隆及百草枯的校准曲线，结果如表1。由表1可见，百草枯测定的浓度最低。 固化与未固化叶绿体活性的差异 取含有相同浓度叶绿素的悬浮液和固化膜，分别测出未加除草剂的放氧量P0，计算 （P0- Pi）/ P0，结果如表 2 。可见，利用PVA-SbQ固定叶绿体膜比用叶绿体悬浮液检测的氧减少率高。即PVA-SbQ固定叶绿体膜的活性高 ，用于除草剂的检测灵敏度高于叶绿体悬浮液。 不同固定方法对叶绿体膜活性的影响 取冷藏于-20oC冰箱中的含有相同浓度叶绿素的PVA-SbQ固化膜、戊二醛－ 牛血清蛋白固定叶绿体膜以及海藻酸钙固定叶绿体膜，按照上述实验方法 ，分别测定它们在放置不同时间时对H2O2 响应的校正曲线，计算曲线的斜率，结果如表3 。 可见，PVA-SbQ 固定叶绿体膜在不同时间下都具有比其 它两种固定化方法更高的活性。 重现性 每次测定时更换叶绿体膜片，分别对0.05mg/L敌草隆进行测定（n＝11），得RSD＝ 5.4％。重现性与溶液、温度等测定条件有关，为保证测量的精确度，还应使用大小相同的PVA-SbQ膜。 结论 实验利用除草剂对叶绿体膜中束缚酶催化H2O2分解产生氧的反应的抑制作用，提出测定痕量除草剂的方法。该法灵敏、简便、快速，可用来测定样品中的除草剂残留量。同时，对PVA-SbQ固定叶绿体膜的研究表明，该固定法能最大程度地保持叶绿体膜中H2O2抗胁迫酶的活性，并且保存寿命长，使用方便。 References Thank you ~ * 聚乙烯醇—苯乙烯吡啶聚合固定叶绿体膜的制备并用于残留除草剂检测 实验原理 在非光照条件下 ，叶绿体具有降解双氧水的抗胁迫能力，即叶绿体束缚酶能催化双氧水分解产生O2，而绝大多数除草剂对该反应有较强的抵抗作用。 反应方程式 2H2O2 叶绿体束缚酶 2H2O ＋ O2 特点 研究了 PVA-SbQ 光聚合物固定化叶绿体膜的性质，结果证明该法固定的叶绿体束缚酶具有活性高、寿命长和使用方便等特点。 聚乙烯醇—苯乙烯吡啶聚合固定叶绿体膜的制备并用于残留除草剂检测 将叶绿体处理后用聚乙烯醇-苯乙烯吡啶 ( PVA -SbQ)聚合膜进行固定 ，得到固定化的叶绿体膜，该膜中叶绿体束缚酶能催化H2O2的分解产生氧 ，而除草剂对该指示反应有抑制作用。利用氧电极 ，建立了新的用于检测痕量除草剂的电流分析法。 检测痕量除草剂的电流分析法 检测范围 所检测的除草剂有阿特拉津、莠灭净、草净津、西玛三嗪、扑草净、敌草隆和百草枯等，检测浓度范围分别为0.25～1.75，0.04～0.70，0.10～1.10，0.10～0.80，0.20～1.80，0.01～0.12和0.006～0.02mg/L。 实验部分 叶绿体的提取和固定 实验仪器 氧分析仪及氧电极 组织捣碎机 高速冷冻离心机 BH2型相差显微镜 超级恒温槽 H-600型透射电子显微镜 CliniBio-128oC酶标仪 UTL1386-3V型低温冰箱 将新鲜菠菜叶片破碎，分离出叶绿体，测定其中叶绿素的含量。再利用PVA-SbQ 光聚合技术将叶绿体固定。 实验部分 实验试剂和实验材料 PVA-SbQ规格如下：SbQ浓度为1.34×1