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AdvCell? 免疫细胞无酚红无血清培养基 AdvCell? 免疫细胞无酚红无血清培养基（BICBM0002）的核心是采用无血清替代物为细胞提供一个营养全面和平衡的环境。产品适用于人及哺乳类动物免疫细胞的培养,包括T、DC﹑CIK、NK等细胞的研究及应用。一方面，鉴于培养基无酚红特性，在细胞培养过程中若需检测光吸收， 可排除酚红的干扰；另一方面，在培养细胞之后获得的上清液可直接用作美容护肤品添加物。通过添加不同的细胞刺激因子，可高效快速扩增相应的免疫细胞。 ★ 产品号 Cat No : BICSFM0002 ★ 产品组成 名称 产品号 规格 储藏条件 运输 AdvCell? 免疫细胞无酚红基本培养基 AdvCell? Immune Cell Phenol Red-free Base Medium BICBM0002 500 ml 2-8℃避光 冰袋/常温 AdvCell? 免疫细胞添加物A AdvCell? Immune Cell Culture Supplement A BICS0001A 20 ml -20℃避光 干冰 AdvCell? 免疫细胞添加物B AdvCell? Immune Cell Culture Supplement B BICS0001B 1 ml -20℃避光 干冰 ★ 产品适用范围 适用于人及哺乳类来源的免疫细胞包括T、DC、CIK、NK 细胞的培养。 ★ 培养条件 37℃，5％ CO2 无菌恒温培养。 ★ 操作步骤 以下过程作为常规免疫细胞无酚红培养的一般准则，如需在生物反应器或培养袋中高密度培养，应优 化条件来确定最佳的操作步骤，BICSFM0002中各组分（BICBM0002、BICS0001A、BICS0001B）在使用前37℃ 解冻之后混合。 【T 细胞培养】 准备新鲜的外周血单个核细胞（PBMC），或根据标准的外周血单个核细胞解冻程序，在37℃的水浴，快速 解冻（〈1 分钟）冻存的外周血单个核细胞。 2.用生理盐水洗涤细胞，根据需要也可加入2-5％热灭活的人自体血浆。 3.用电子（即 Coulter 计数器，VI-细胞）或手动的方法（即血球计数仪）给细胞计数。 4.离心细胞，清除洗涤缓冲液。 5.加入用AdvCell? 免疫细胞无酚红基本培养基（BICBM0002）培养，培养初期，用含细胞因子（如IL-2）的培养基重悬PBMC，CD3+ T 细胞密度保持在大约0.5-1×106/ml，转移细胞到相应的细胞培养容器（培养袋、培养瓶）。随后可应用各种操作激活 T 细胞，包括添加刺激的抗体或抗原呈递细胞。无论培养T 细胞的规模大小，细胞均可被隔离，激活和扩大。 在37℃，5％CO2 的潮湿培养箱中培养细胞，给予并维持细胞在对数期生长所需要的营养。为了保持细胞 在对数期的增长，当细胞密度超过1×106/ml 时，需要分离传代，维持细胞密度在0.5-1×106/ml（例如， 2×106个细胞/ml 以上，按1：4 比例0.5×106 细胞/ml）。在静态平板培养中为了获得最佳的气体交换， 建议培养基深度不超过1 到1.2 cm。 【单核细胞树突状细胞﹙DC﹚培养】 1.准备新鲜的外周血单个核细胞（PBMC）。 2.将外周血单个核细胞铺在培养瓶中，加入适量 AdvCell? 免疫细胞无酚红基本培养基（BICBM0002）。 3.在37℃，5% CO2 的恒温培养箱中孵育2-3 小时。 4.弃掉含非贴壁细胞的培养基。 5.用生理盐水洗涤贴壁细胞（主要是CD14+单核细胞）三次。 6.添加重组人IL-4 和重组人GM-CSF 到 AdvCell? 免疫细胞无酚红基本培养基（BICBM0002），至终浓度分 别为50～100 ng/ml 和50 ng/ml，并以此培养基培养贴壁细胞。保持细胞度在1～3×105 细胞/cm2 之间。 研究者可视情况加入灭活的人自体血浆。 在37℃，5% CO2 的潮湿培养箱中连续孵育5天，建议培养3天左右已添加了IL-4 和GM-CSF 的 AdvCell? 免疫细胞无酚红基本培养基（BICBM0002）换液，换液过程保留贴壁和不贴壁的所有细胞。 培养6天之后，细胞表现出典型的树突状细胞的形态和表面标记（细胞CD1a、CD80、CD86、HLA-DR）。 向 AdvCell? 免疫细胞无酚红基本培养基（BICBM0002）中添加1 ng/ml 的LPS 或者50 ng/ml 的TNF- α诱导的树突状细胞的成熟。 【CIK细胞培养】 将采集的外周血收集到2支离心管中，2000 rpm/min离心5 min，弃上清，将沉淀细胞混合，