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把蛋白质和DNA区分开,直接地、单独地观察DNA和蛋白质的作用 5、通过此项技术表明赫尔希的研究思路是什么? (一)标记噬菌体方法:同位素示踪(标记)法 1、标记大肠杆菌 在分别含有放射性同位素32p 和35s的培养基中培养细菌 大肠杆菌 + 含35s的培养基 含 35s的大肠杆菌 大肠杆菌 + 含32p的培养基 含32p的大肠杆菌 2、标记T2噬菌体 用上述细菌培养T2噬菌体,分别制备含32p 的噬菌体和含35s的噬菌体 T2噬菌体+含35s的大肠杆菌 含35sT2的噬菌体 T2噬菌体+含32p的大肠杆菌 含32pT2的噬菌体 思考:(1)、为什么用大肠杆菌培养噬菌体,而不用培养基培养? 病毒只寄生在活细胞中 (2)能不能同时对同个噬菌体标记35S又标记32P? 检测时蛋白质外壳和DNA均有放射性 (二)实验步骤: 标记细菌 标记噬菌体 已标记噬菌体侵染未标记的细菌(短时间保温) 搅拌离心 观察放射性的分布 (一组用32 P标记DNA,一组用35S标记蛋白质) 搅拌的目的:使吸附在细菌上的噬菌体颗粒与细菌分离 内部DNA不存在了的噬菌体外壳 离心的目的:让上清液中析出重量较轻的噬菌体颗粒,而离心管的沉淀物中留下被感染的大肠杆菌。 “短时间”:保证子代噬菌体的DNA和蛋白质在大肠杆菌中正处于合成阶段,子代噬菌体还没有组装好,或虽已经组装但并未使细菌发生裂解 “保温”:为噬菌体培养提供适宜的恒定的温度,以保证酶的活性。 离心 离心 1、 为什么选择35S和32P作标记而不选用其他的同位素? 2、 第一(二)组实验中为什么上清液的放射性很高(低),沉淀物的放射性很低(高)? 因为硫仅存在于T2噬菌体的蛋白质组分中,而磷则主要存在于 DNA的组分中。用14C和18O等元素是不可行的,因为 T2噬菌体的蛋白质和DNA分子的组分中都含有这两种元素。 在第一组实验中,35S标记的T2噬菌体与大肠杆菌混合培养后,搅拌不充分,使吸附在大肠杆菌外被35S标记的噬菌体蛋白质外壳没有与大肠杆菌完全分离开,离心后进入沉淀物中,使沉淀物中出现放射性 。 在第二组实验中,32P标记的噬菌体和大肠杆菌混合培养的时间过长,噬菌体在大肠杆菌细胞内增殖后释放出来,经离心后分布于上清液;混合培养的时间过短,有部分噬菌体没有侵染到大肠杆菌细胞内,经离心后分布于上清液中,使上清液出现放射性 。 噬菌体比大肠杆菌轻 (三)噬菌体侵染细菌实验的检测结果: 上清液: 沉淀物: 噬菌体 细菌 (外壳) (被注入的DNA) 35S标记的实验 32P标记的实验 标记部位 放射性情况 上清液 沉淀物 蛋白质 DNA 有放射性 无 无 有放射性 上清液“放射性很高” 沉淀物“放射性很高”? 沉淀物也有放射性 上清液也有放射性 ——分离不完全 (噬菌体蛋白质外壳) ——释放出来的、未侵染的噬菌体 /释放的/未侵染的) 很高 很低 很低 很高 第二组实验 (三)实验结果及结论: 第一组 实验 亲代 噬菌体 32P标记DNA 35S标记蛋白质 大肠杆菌内 有32P标记DNA 无35S标记蛋白质 子代 噬菌体 DNA有32P标记 外壳蛋白质无35S 实验结论 DNA分子具有连续性,是遗传物质 结论:噬菌体侵染细菌时,DNA进入到细菌的细胞中,而蛋白质的外壳仍留在外面。因此,子代噬菌体的各种性状,是通过亲代的DNA传递的。DNA才是真正的遗传物质。 DNA 是遗传物质 1928年 格里菲思 ——体内转化实验 1944年 艾弗里——体外转化实验 1952年 赫尔希、蔡斯——噬菌体侵染细菌实验 经典实验 DNA是唯一的遗传物质吗? 流感病毒 SARS病毒 烟草花叶病毒 下面这些生物的遗传物质是什么? [敢于质疑] 如果你是科学家,请设计实验证明烟草花叶病毒的遗传物质是什么? 背景知识:烟草花叶病毒TMV是由RNA和蛋白质组成的,在感染烟草时,会出现致病斑。 [课堂延伸] 烟草花叶病毒不含DNA,只有RNA和蛋白质,其遗传物质是什么? 烟草花叶病毒的遗传物质是RNA 思路:烟草花叶病毒的RNA和蛋白质区分开,直接地、单独地去观察他们各自的作用,从而判断谁才是遗传物质 ①仅RNA能使烟草产生原样病斑②仅蛋白质能使烟草产生原样病斑③RNA和蛋白质都能使烟草产生原样病斑 若出现①结果则仅RNA是遗传物质; 若出现②结果则仅蛋白质是遗传物质; 若出现③结果则RNA和蛋白质都是遗传物质 预测结果: (现象) 提出问题: 作出假设: 设计实验: 课题:探究烟草花叶病毒的遗传物质是什么? 得出结论: 实验探究 蛋白质 RNA 分 离 感染 烟草 感染 烟草
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