222动物细胞融合与单克隆抗体.pptVIP

单：一个杂交瘤细胞 克隆：该细胞增殖分化为相同的细胞群 抗体：该细胞群产生的抗体。 特点：特异性强 灵敏度高 （1）单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？ 单克隆抗体的应用 应用: 疾病的诊断、治疗和预防。 实例: 1、各种癌症、肝炎病毒、SARS病毒、细菌 及血吸虫等数百种疾病的诊断； 2、在疾病治疗方面，单克隆抗体犹如人体卫士,能识别“自己”与“异己”，一旦发现致病因素便与之结合将其杀死。 3、若在单抗上带上抗癌药物制成“生物导弹”，将药物定向带到癌细胞所在部位，既消灭了癌细胞又不会伤害健康细胞。 * * 动物细胞融合与单克隆抗体 一、动物细胞融合 1、概念： 两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，又称细胞杂交。 2、过程 物理法 化学法 生物法： 灭活的病毒 动物细胞A 动物细胞B 杂种细胞 3、动物细胞融合的意义： 突破有性杂交局限，实现远缘杂交。 诱导动物细胞融合的方法 仙台病毒 （灭活） 紫外线 丧失感染活性 （不感染细胞） 保留融合活性 (诱导细胞融合） 物理法： 化学法： 生物法： 离心、震荡、电激 聚乙二醇（PEG） 动物细胞融合 杂种细胞 愈伤组织 杂种植株 植物细胞A 植物细胞B 原生质体A 原生质体B 植物体细胞杂交 去壁 融合 组培 物理法 化学法 生物法： 灭活的病毒 动物细胞A 动物细胞B 杂种细胞 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用 途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振 荡、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 细胞融合的原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物、动物细胞融合的比较 二、单克隆抗体 提出问题1：长期以来，人们为了获得抗体，采用的 是什么方法？有何特点？ 把某种抗原反复注射到动物体内， 然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。 这种方法获得的抗体特点：产量低，纯度低，特异性差。 提出问题2：动物血清中的抗体是什么细胞合成的？ B淋巴细胞 提出问题3：什么细胞可以无限增限制呢？ 骨髓瘤细胞 提出问题4：如何让不能无限增殖的B淋巴细胞具有 无限增殖性？（利用本节所学知识） 提出问题5：如果只考虑细胞两两融合，会有几种结果？ 3种：两个淋巴细胞融合、两个骨髓瘤细胞融合、 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合 提出问题6：我们需要的是哪种？如何筛选得到？ 利用淋巴细胞不能增值的特点直接淘汰， 利用骨髓瘤细胞不能合成抗体的特点用选择培养基淘汰 让B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成杂种细胞 单克隆抗体的制备过程 融合，筛选 细胞培养 抗原 小鼠 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 筛选，继续培养 体外培养 体内培养 单克隆抗体 为什么要先免疫小鼠？ 单克隆抗体的理解 思考： （2）细胞融合时除了两两融合 的以外还有其他情况吗？ （3）制备过程为何要经过两次筛选？ 细胞融合技术、细胞培养技术。 第一次筛选得到杂交瘤细胞，第二次筛选先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞下培养筛选出特异抗体的细胞群。 有，还有未融合的细胞存在。 克隆的概念　　“克隆”从英文“clone”音译而来，其定义是 无性繁殖系，在生物学领域有3个不同层次的含义。 现在引申出的概念： 遗传背景完全相同的一个群体。 1）DNA水平， 　 2）在细胞水平， 3）在个体水平，