第四章复习思考题及答案1.用光学显微镜观察细菌时,为什么一般都.docVIP

第四章 复习思考题及答案 1. 用光学显微镜观察细菌时, 为什么一般都需要先将细菌进行染色？ 制作细菌染色标本片时，为什么必须先对涂在载玻片上的细菌样品进行固定？ 固定时应注意什么问题？ 答：由于细菌细胞小且无色透明, 直接用光学显微镜观察时, 菌体和背景反差很小，难以看清细菌的形态, 更不易识别某些细胞结构, 因此，一般都需要先将细菌进行染色, 借助于颜色的反衬作用, 以提高观察样品不同部位的反差, 能更清楚地进行观察和研究。 此外，某些染色法还可用于鉴别不同类群的细菌, 故细菌的染色是工业微生物学实验中重要的基本技术。 染色前必须先对涂在载玻片上的细菌样品进行固定，固定的作用一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上, 一是增加菌体对染料的亲和力。 一般常用酒精灯火焰加热固定的方法，但应注意防止细胞膨胀和收缩，尽量保持细胞原形。 2. 革兰氏染色法包括哪几个基本步骤？ 你认为影响革兰氏染色结果正确性的关键环节是什么？ 答：革兰氏染色法的基本步骤是: 先用初染剂草酸铵石酸复红细菌不被酒精脱色，能保持结晶紫与碘的复合物而呈紫色，称革兰氏阳性细菌；细菌能酒精色，被复红复染成红色称为革兰氏阴性细菌。→ 初染 → 媒染 → 脱色 → 复染 → 干燥 → 观察。 影响革兰氏染色结果正确性的关键环节是用脱色剂乙醇处理, 为了保证革兰氏染色结果的正确性, 必须控制乙醇脱色时间, 尽量采用规范的染色方法。 3. 放线放线菌与细菌的单染色一样，可用石酸复红或吕氏美兰等染料着色后，在显微镜下观察其形态。为了观察放线菌自然生长状态下的形态特征,各种培养和观察方法, 其中印片法插片法玻璃纸法三种常用方法观察酵母菌可制备水浸片，若加入一滴美兰染色液，还可区别死活细胞（呈兰色的为死细胞，无色的为活细胞）, 因活细胞具有较强的还原能力，能使无毒性美蓝从蓝色的氧化型变成无色的还原型。霉菌具有复杂分枝的菌丝体, 分基内菌丝和气生菌丝。气生菌丝分化产生繁殖菌丝, 再由繁殖菌丝产生子。霉菌菌丝较粗大，制片时容易收缩变形，孢子也容易分散为了得到清晰、完整、保持自然状态的，常用载片培养法和玻璃纸培养法进行制片观察。→ 制备支持膜 → 转移支持膜到载网上 → 制备微生物电镜样品。 5. 何谓微生物的纯培养技术？主要包括哪些技术内容？ 答：在微生物学中，通常只有纯培养物才能被较好地进行研究、利用和重复其结果；在工业发酵生产中，绝大多数情况下也只有采用纯培养物, 才能实施正常运作和具有实用价值。因此, 把特定的单一微生物从自然界 (或含菌样品) 以混杂存在的状态中分离出来、经纯化、转接、繁殖、并以纯培养物的形式保藏下来等一系列操作技术, 称之为纯培养技术。它是进行微生物学研究和工业发酵生产最基本的技术。 纯培养技术主要包括：培养基配制灭菌高压蒸汽灭菌干热灭菌的操作方法配制培养基一般称量 → 溶→ 调pH值 →→ 过滤 → 分装→ 加棉塞 → 包扎 → 灭菌 → 摆斜面 → 无菌检查。 高压蒸汽灭菌法 一般无菌水2或15 Ib/in2 ), 约120℃维持15～20分钟, 便可达到彻底灭菌的目的；单独玻璃器皿2 ), 但温度并没有达到要求。 干热灭菌灭菌纯化纯化纯化纯干燥器培养培养平板法分离培养为：斜面冰箱保藏法液体石蜡保藏法沙土管保藏法保藏法冷冻干燥保藏法斜面冰箱保藏液体石蜡保藏法沙土管保藏的保藏 但不能用于保藏营养细胞；保藏法藏冷冻干燥保藏法综合利用了各种有利于菌种保藏的因素（低温、干燥和缺氧等），是目前最有效的菌种保藏方法之一；培养基培养基发酵发酵发酵→ 检样的采取 → 检样的稀释 → 倾注平板及培养 → 菌落总数的计算 → 菌落总数的报告。 食品中大肠菌群数是以每100毫升(克)检样中大肠菌群最可能数(MPN)表示的。多管发酵法检测食品中大肠菌群数的操作过程为：培养基的制备 → 食品检样稀释 → 乳糖初发酵试验 → 平板分离培养 → 证实试验 → 报告MPN。 14. 噬菌体的检查根据什么原理？ 试述单层琼脂平板法检查噬菌体和双层琼脂平板法测定噬菌体效价的方法及操作过程。 答：噬菌体侵染敏感寄主细胞后, 释放出子代噬菌体, 通过琼脂再扩散到周围的细胞中, 继续侵染引起更多细胞裂解, 从而在平板上形成一个个肉眼可见的透亮无菌近圆形的空斑, 称为噬菌斑, 它是噬菌体存在的一种特性标志, 由此检出噬菌体的存在。 单层琼脂法 将指示菌液和经适当稀释的噬检液与单层培养基一起倾注平板。充分混匀并凝固后，置适温下培养约12 h，观察计数。此法较简便，可用于噬菌体的效价测定。但若培养基较厚易产生上下噬菌斑重叠现象，影响计数的准确性。 双层琼脂法 一般采用的效价测定方法。 双层琼脂法是先用含2％琼脂的固体培养基倾注底层平板，再在其上倾注一薄层半固体上层培养基，