第二章_培养基灭菌2讲解.ppt

 上一小节重点内容小结 ? 微生物的热死灭动力学 对培养基进行湿热灭菌时，培养基中的微生物受热死亡（微生物体内蛋白质变性）的速率与残存的微生物数量成正比。 K（比热死亡速率常数）由两个因素决定 1、微生物的种类和存在方式 2、灭菌温度 灭菌动力学的重要结论 高温短时灭菌 对 取对数得： ln K = - △E /RT + ln A K与△E 、T有关，T↑，K↑ 对ln K = - △E /RT + ln A 两边求T的导数 d (ln K)/ dT = △E /RT2 K对T的变化率 细菌孢子热死灭反应的△E很高，而大部分营养物质热破坏反应的△E很低，因而将T提高到一定程度会加速细菌孢子的死灭速率，从而缩短在升高温度下的灭菌时间（ ln(N/N0 ) = - K t ）；由于营养成分热破坏的△E很低，上述的温度提高只能稍微增大其热破坏温度，但由于灭菌时间的显著缩短，结果是营养成分的破坏量在允许的范围内。 分批灭菌的设计 分批灭菌的操作 分批灭菌：指每批培养基全部流入发酵罐 后，在罐内通入蒸汽加热至灭菌温度，维 持一定时间，再冷却到接种温度。 优点： （1）设备造价低，不需另设加热、冷却装置； （2）操作要求低，可手动控制； （3）适用于种子罐和小批量生产规模； （4）适用于介质中含有大量固体物质的场合。 缺点： （1）加热和冷却时间长，使发酵罐利用率低； （2）易发生过热而破坏营养成分的现象。 三 分批灭菌的设计 要求绝对的无菌在工业上很难做到， 因为： 三 分批灭菌的设计 而且绝对的无菌也是不必要的，工程上只要求培养基中杂菌降低到合理的程度，然后进行细胞的培养，失败的可能性很小。 那么无菌程度降低到多少为好呢？ 有一个设计标准（判据） 三 分批灭菌的设计 培养基灭菌程度N / N0的要求因发酵系统而异。 某些培养过程，由于培养基中的基质不易被一般微生物利用,或温度、pH不适于一般微生物的生长，则对无菌程度要求低；但是有一些培养过程对无菌程度要求高，例如抗生素的生产过程。 三 分批灭菌的设计 常取N=10-3个/罐。 它的意义是：灭菌103次，存活一个活菌孢子的机会为1次。 例如：培养基100m3，含菌105个/ml,，要求灭菌后存活菌数10-3个/罐 三 分批灭菌的设计 分批灭菌过程：升温、保温和降温，灭菌主要是在保温过程中实现的，在升温的后期和冷却的初期，培养基的温度很高，因而对灭菌也有一定贡献。 三 分批灭菌的设计 在灭菌过程中，必需设计出灭菌过程的操作时间和温度。 首先根据培养过程对培养基无菌程度的要求提出无菌判据ln （N0/N） ，然后依据所使用的灭菌设备，和设计出的灭菌温度和时间来计算出实际的ln（N0/N），看能否达到开始提出的无菌要求。 ln (N0/N1) = K(t1-t0) K是变数，t变化，T变化，K也变化。 是否有这样的函数关系呢？ 一些学者已经作出的常用的换热方式T-t关系式。 除了这种积分方式以外，工程上还常用图解积分法，即从设计的T-t数据换算成K-t数据，进行图解积分。 三 分批灭菌的设计 例如：某发酵罐分批灭菌最高温度120℃，保持5min，设计的温度和时间关系如下： （A=7.94×1038min-1；△E=278441J/mol;R=8.28J/mol·K） 三 分批灭菌的设计 解：先计算无菌程度的判据： N0/N = 6×1015 ln (N0/N )=36.3 K的数据值是由已知数据计算出的 根据已有的数据作出T-t和K-t图 三 分批灭菌的设计 t=34min以前和t=64min以后，K值太小，忽略不计. ln(N0/N1) +ln(N2/N3)按图解积分，求得 ln(N0/N1) +ln(N2/N3)=15.85 ln(N0/N3)= 没有达到N3=10-3的要求 , 残留菌数N3= N0e-Kt=N0 e-33.8=1.26×10-2 三 分批灭菌的设计 保温阶段对杀死孢子的贡献: 17.95/33.8=53%，而保温阶段时间只有5min。 那么如何改进设计呢？ (1)?增加保温时间，如果增加1min,那么 ln (N1/N2) =3.59×6=21.54 那么ln (N0/N3) =21.54+15.85=38.39， 达到了设计要