实验21外界因素对酶活性的影响_基础生物学实验(安徽大学研究生复试用,生物生命科学).doc

实验二十一 外界因素对酶活性的影响 一、实验目的 1.了解外界因素对酶活性及酶促反应速度的影响。 2.加深对酶特性的认识。 二、实验原理 酶的化学本质是蛋白质，它极易受外界条件的影响而改变它的构象及性质，因而也必然会影响到它的催化活性。酶对温度、pH值、酶浓度及某些离子浓度等变化很敏感。 (一)pH值对酶活性的影响 酶的活性受环境pH的影响极为显著，通常各种酶只有在一定的pH范围内才能表现它的活性。一种酶表现其最高活性时的pH值称为该酶的最适pH。高于或低于最适pH值时，酶的活性降低。酶的最适pH值受酶的纯度、底物的种类和浓度、缓冲液的种类和浓度以及环境温度等条件影响。 (二)温度对酶活性的影响 每种酶都有其最适温度，高于或低于此温度酶的活性都降低。一般而言，若酶处于过高的温度环境中，会使酶活性永久地丧失；而若处于极低温度的环境中只会使酶活性受到抑制，一旦温度适宜，酶又会全部或部分地恢复其活性。 (三)酶浓度对酶促反应速度的影响 在其它条件不变的情况下，若反应物浓度大大高于酶浓度时，则反应速度随酶浓度增加而增加，两者间成正比关系，即：V=k[E] 但若反应底物浓度较低，而且酶的浓度足够高时，增加酶浓度，反应速度基本不变。 (四)离子对酶活性的影响 就唾液淀粉酶而言，低浓度Cl- 可以增加酶活性，高浓度的Cl- 或者低浓度的Cu2+则会抑制酶的活性，而低浓度的Na+、SO42-等对酶活性没有影响。不同的酶对不同的离子具有不同的效应。 三、实验用品 （一）材料 淀粉、唾液淀粉酶。 （二）器材 冰箱、电炉、恒温水浴锅和铜水浴锅、试管架及试管、移液管架及移液管、锥形瓶。 （三）试剂 1. 0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液 称取35.61g含2个结晶水的磷酸氢二钠，用水定容至1 L。 2. 0.1 mol/L柠檬酸溶液 称取21.01g含1个结晶水的柠檬酸，用水定容至1 L。 3. 唾液淀粉酶 将唾液分别稀释10倍，50倍和100倍，得三种浓度的酶液。 4. O.5%淀粉的0.5%氯化钠溶液 0.5 g可溶性淀粉和0.5g氯化钠，溶于100 ml蒸馏水(需加热)。 5. 0.1%淀粉液 0.1g可溶性淀粉，加到100ml蒸馏水中，加热溶解。 6. 碘液 15g碘化钾和12.7g的碘，加少许水使碘完全溶解后，再用水稀释至200ml。 7. 1%氯化钠溶液。 8. 0.1%硫酸铜溶液。 四、实验操作 (一)pH对酶活性的影响 1．缓冲溶液的配制 取6只洁净的三角烧瓶，按表21-1编号和加试剂： 表21-1 磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲溶液的配制 三角烧瓶号 1 2 3 4 5 6 pH值 5.4 6.2 6.8 7.O 7.4 8.O 0.2 mol/L磷酸氢二钠(ml) 11.15 13.22 15.45 16.47 18.17 19.45 0.1 mol/L柠檬酸(ml) 8.85 6.78 4.55 3.53 1.83 O.55 2.取6支洁净试管，分别编号后，按表21-2操作： 表21-2 pH对酶活性的影响 管 号 1 2 3 4 5 6 pH值 5.4 6.2 6.8 7.O 7.4 8.O 缓冲液量(ml) 3 3 3 3 3 3 含NaCl的0.5%淀粉(ml) 2 2 2 2 2 2 稀释100倍唾液(ml) 2 2 2 2 2 2 充分摇匀 37℃保温，1 min后，用滴管从3#管中吸1滴反应液，放白瓷板用碘液检验(1滴)。以后每隔1min检验一次。当3#管反应液遇碘液呈淡黄色时，立即向6支管中加碘液 碘液(滴) 2 2 2 2 2 2 充 分 摇 匀 实验结果 (二)温度对酶活性的影响 取3支洁净试管，按表21-3操作： 表21-3 温度对酶活性的影响 管 号 1 2 3 pH6.8磷酸缓冲液(ml) 2 2 2 含NaCl的O.5%淀粉液(ml) 2 2 2 立即处理温度 O℃ 100℃ 37℃ 另取3支试管 1， 2， 3， 稀唾液1：50(ml) 1 1 1 处理温度 O℃ 100℃ 37℃ 平衡时间 10 min 将1，、2，、3，试管的稀唾液分别倒人1、2、3管中 作用时间 10 min 分别从l、2、3支试管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果 改变处理温度至 37℃ 37℃ 作用时间 10 min 再分别从1、2、3管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果