实验三：线粒体和细胞核制备与观察.pptVIP

细胞生物学实验 细胞生物学实验 实验三 线粒体和细胞核的制备与观察 细胞内线粒体的超活染色与观察 细胞生物学实验 实验目的 掌握用差速离心法分离动物细胞核及线粒体的技术. 掌握分级分离细胞核与线粒体的纯度检测方法 学习线粒体活性染色技术, 观察活细胞内线粒体的形态、数量与分布 了解密度梯度离心法纯化线粒体的方法. 实验原理 制备线粒体及细胞核采用组织匀浆在悬浮介质中进行差速离心的方法 悬浮介质通常采用一定pH的缓冲蔗糖溶液，它较接近细胞质的分散相，在一定程度上能保持细胞器的结构和酶的活性. 詹纳斯绿B是一种是毒性较小的碱性染料，能对动植物的细胞或组织在活体状态下进行无毒害的染色，其原理主要是碱性染料的胶粒表面带有阳离子，而被染部分本身具有阴离子，这样，它们彼此之间发生吸引作用，染料就被堆积下来。 细胞核由脱氧核糖核酸和 强碱性的组蛋白、精蛋白等形式的核蛋白所组成，在DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的碱性染料以离子或氢键结合而被染色，此外，由于核蛋白中还有少量的弱酸性物质，因此，詹纳斯绿B也能被堆积下来而使细胞核呈现蓝色。 线粒体内膜上分布有细胞色素氧化酶,该酶能使脂溶性的詹纳斯绿B染料保持在氧化状态呈现蓝绿色，从而使线粒体显色，而胞质中的染料被还原成无色. 线粒体能在詹纳斯绿B染液中维持活性数小时，通过染色，可以在高倍显微镜下观察到