红色荧光蛋白的原核表达.docVIP

红色荧光蛋白（RFP）的原核表达 报告题目 红色荧光蛋白（RFP）的原核表达 作者姓名 饶慧 班级学号 0802班/2008114010214 指导教师 王友如 完成时间 2011年02月 生物学实验教学中心 目 录 引言 1 1 实验材料及实验仪器 4 1.1实验材料 4 1.2实验仪器 5 2 实验方法 7 2.1 重组质粒的构建 7 2.2工程菌株的活化 7 2.3诱导表达 8 2.4 SDS检测表达蛋白 8 3 结果与分析 9 总结 10 参考文献 11 致谢 13  红色荧光蛋白的原核表达 饶慧 （指导老师：王友如） （湖北师范学院生命科学学院 生物科学0802班（Red Fluorescent Protein，RFP）基因在大肠杆菌中原核表达。 实验：通过分别将DH-5ɑ(pDsRed-N1)和DH-5ɑ (pET-28ɑ)提取质粒、酶切并连接形成重组质粒pET-28a-RFP，将重组质粒通过转化的方法把含红色荧光蛋白（RFP）外源基因转入大肠杆菌体内进行表达，再用IPTG诱导RFP基因表达，可以看到显现红色，最后根据SDS电泳结果，判断RFP基因在大肠杆菌中是否成功表达。 实验结果：结果显示构建的重组质粒pET-28ɑ-RFP在E.coli中成功表达 Prokaryote Expression of Red Fluorescent Protein (RFP) Rao Hui (Class 0802, College of Biology Science ,Hubei Normal University, Huangshi, Hubei,435002 ) Abstract Objective: To study the expression of the RFP gene in the E.coli. Methods: Extract the plasmid of the DH-5ɑ (pDsRed-N1) and DH-5ɑ (pET-28ɑ). Then the two plasmids are cut by enzyme and are connected to form pET-28a-RFP recombined plasmid. Guiding the recombined plasmid, which contains exogenous genes of RFP, into E.coli for expression, through transformative method. The expression of RFP gene can be induced by the IPTG and then we can see red. Finally, judging whether the RFP gene has expressed successfully in E.coli according to the results of SDSelectrophoresis. Results: The results suggest that pET-28ɑ-RFP recombined plasmid has successfully expressed in E.coli. Keywords Red Fluorescent Protein; Recombined Plasmid; Prokaryote Expression; Induced Expression 红色荧光蛋白的原核表达 饶慧 （指导老师：王友如） （湖北师范学院生命科学学院 生物科学0802班 湖北 黄石 435002） 引言 基因标记技术是近年来发展起来的分子生物学技术。荧光蛋白基因在标记基因方面由于具有独特的优点而引起了科学家的广泛关注，现已被普遍应用到分子生物学研究的各个方面。荧光蛋白在某种定义下可以说是革新了生物学研究——运用荧光蛋白可以观测到细胞的活动，可以标记表达蛋白，可以进行深入的蛋白质组学实验等等。特别是在癌症研究的过程中，由于荧光蛋白的出现使得科学家们能够观测到肿瘤细胞的具体活动，比如肿瘤细胞的成长、入侵、转移和新生。 　1999年，Matz 等[2]从印度洋—太平洋地区的珊瑚虫中分离出6 种与绿色荧光蛋白(green fluorescentproteins ,GFP) 同源的荧光蛋白,并鉴定了它们的光谱性质。红色荧光蛋白(Red luorecent Protein,RFP)基因是从海葵Discoso-masp中分离出的