KPC酶的研究进展.ppt

KPC酶的检测方法 采用改良的Hodge试验， PCR直接检测KPC酶的基因。 改良Hodge试验 0.5麦氏浊度单位大肠埃希菌 ATCC25922涂布MH平板 中间贴亚胺培南（10μg）纸片 接种待检菌的无菌接种环自 纸片外缘向平板边缘划线 35℃过夜培养 结果判断：亚胺培南抑菌圈内出现 待检菌矢状生长者为产碳青霉烯酶 菌株 E coli ATCC25922 改良Hodge试验 改良 Hodge 试验 发现KPC的敏感性高达100% ; 其它碳氢酶烯酶存在时试验也呈阳性 特异性90% Lee et al. CMI, 7, 88-102. 2001. PCR扩增及测序KPC结构基因 对上述细菌PCR检测KPC基因，无丙二酸盐枸橼酸杆菌（C1）、肺炎克雷伯菌（A1500）显示948bp左右条带，阳性对照是浙江二院赠送的产KPC-2的肺炎克雷伯菌。经测序，Blasting比对证实，为KPC-2基因 KPC – 问题 如果发现菌株产KPC，是否应该将碳氢酶烯类抗生素敏感的结果改为耐药? CLSI建议：报告MIC值，但不报告“S” 或者报告“R”、“I” 任选其一 SUMMARY KPC 属于class A 类 β-内酰胺酶 对包括超广谱头孢菌素类和碳青霉烯类在内的所有β-内酰胺类抗生素耐药 KPC酶 最常见于肺炎克雷伯菌 也曾有过报道:产酸克雷伯菌, 弗劳地枸橼酸杆菌,肠杆菌属某些种, 大肠埃希菌,沙门菌属某些种,沙雷菌属, 在铜绿中也曾有过报道（哥伦比亚） SUMMARY KPC酶位于质粒上; 接合和非接合 blaKPC两侧通常携带转座子序列 报道过的质粒blaKPC 常伴有: 一般β-内酰胺酶 超广谱β-内酰胺酶 氨基葡糖苷类耐药 质粒介导的氟喹诺酮耐药 SUMMARY 如果临床菌株对第三、第四代头孢菌素“R”， 厄他培南≥2μg/ml（19-21mm) *亚胺培南、美罗培南2-4μg/ml （16-21mm) 应进行改良 Hodge 试验 对碳氢酶烯类抗生素敏感而Hodge 试验 （+）的菌株，CLSI建议：报告MIC值，但不报告“S” 求职应注意的礼仪 求职时最礼貌的修饰是淡妆 面试时最关键的神情是郑重 无论站还是坐，不能摇动和抖动 对话时目光不能游弋不定 要控制小动作 不要为掩饰紧张情绪而散淡 最优雅的礼仪修养是体现自然 以一种修养面对两种结果 必须首先学会面对的一种结果----被拒绝 仍然感谢这次机会，因为被拒绝是面试后的两种结果之一。 被拒绝是招聘单位对我们综合考虑的结果，因为我们最关心的是自己什么地方与用人要求不一致，而不仅仅是面试中的表现。 不要欺骗自己，说“我本来就不想去”等等。 认真考虑是否有必要再做努力。 必须学会欣然面对的一种结果----被接纳 以具体的形式感谢招聘单位的接纳，如邮件、短信 考虑怎样使自己的知识能力更适应工作需要 把走进工作岗位当作职业生涯的重要的第一步，认真思考如何为以后的发展开好头。 Thank you 革兰阴性菌感染约占50% 碳青霉烯类抗生素是最后一道防线 碳青霉烯类抗生素耐药现象日益严重 碳青霉烯类 耐药的机制 染色体AmpC酶 加外膜缺失或改变 产水解碳青 霉烯类酶 青霉素结合 蛋白亲和力 的降低 主动外排系统 碳青酶烯酶 碳青霉烯酶是指能够明显水解亚胺培南或美罗培南的一类β内酰胺酶,它包括Ambler分子分类为A、B、D三类酶 碳青霉烯酶 A类为丝氨酸酶 B类是金属酶 D类为丝氨酸酶 碳青霉烯酶的分类 水解底物 酶抑制物 Ambler分子分类 Bush分群 酶 青霉素 一、二代头孢 三代头孢 氨曲南a 亚胺培南a EDTAb 克拉维酸b A 2f NMC + + + + + - + IMI + + + + + - + SME + + +- + + - + KPC + + + + + - + GES + + + - +- - + B 3 IMP + + + - + + - VIM + + + - + + - GIM + + + - + + - SPM + + + - + + - D 2d OXA + + +- - +- - +- 注：a：+，强水解（kcat2s-1）；+-，弱水解（0.5 s-1kcat2s-1）；-，不水解（kcat0.5s-1） b：+，抑制；+-，不确定；-，不抑制 碳氢酶烯酶 分类 酶 最常见的细菌 Class A KPC, SME, IMI, NMC, GES 肠杆菌科 (铜绿中报道较少) Class B (金属-b-内酰胺酶) IMP, VIM, GIM, SPM 铜绿假单胞菌