动物细胞培养准备.ppt

血清的使用与储存 使用前的处理 56℃灭活30min → 去除补体成分 储存条件 灭活后分装成小包装（10mL、20mL、50mL），－20 ℃储存；使用前4 ℃融化，可用1个月。 使用浓度 一般为5％～20％，最常用的是10％。 影响血清的各种因素 年龄：较老动物的血清对细胞生长有抑制作用 血型：AB型血清比A型和O型血清对细胞生长有利 血色素 胆红质 脂肪酸 血清在培养液中的浓度并非越高越好 细胞培养中使用血清的缺点 使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态。 如：血清可以促进成纤维细胞的生长，同时会抑制表皮角质细胞的生长。 血清中含有一些物质对细胞会产生毒性作用。 如：多胺氧化酶 每批血清之间都有差别，其成分不能保持一致。 取材过程中有可能带入支原体、病毒，对培养细胞产生影响。 关于血清的几个问题 血清必须贮存于–20 ～ -70℃，若存放于4℃，请勿超过一个月。如果一次无法用完一瓶，可将40～45 ml分装于无菌50ml 离心管中，由于血清结冻时体积会增加约10 %， 必须预留此膨胀体积之空间，否则易发生污染或容器冻裂之情形。  一般厂商提供之血清为无菌，不需再无菌过滤。若发现血清有许多悬浮物，则可将血清加入培养基内一起过滤，勿直接过滤血清。 瓶装(500ml) 血清解冻步骤(逐步解冻法): -20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天，至室温下全溶后再分装，一般以50 ml 无菌离心管可分装40～45 ml。在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。 血浆：1907年Harrison首次使用 优点：支持培养组织块，供给细胞生长物质。 缺点：易于液化。 2、血浆 阅读：P484、水解乳蛋白5、胶原 回答：胶原在细胞培养中的用途？ 胶原的制备方法？ 胶原的使用方法？ （二）合成培养基 合成培养基：根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。 主要成分：氨基酸、维生素、碳水化合物、无 机盐和其它一些辅助物质。 优点： 标准化生产，组分和含量相对固定。 成本低 缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细 胞生长需要。 常用合成培养基 MEM: 12种氨基酸 +谷氨酰胺 + 8种维生素 广泛适用已建成细胞系的培养 minimum essential medium DMEM: MEM改良 成份加倍 葡萄糖(高糖1000mg/L或者低糖400mg/L) 低糖: 生长速度快,附着性稍差的肿瘤细胞 ; 高糖: 附着性差的细胞 RPMI-1640: 成份简单, 正常细胞和肿瘤细胞,广泛适用 干粉培养基 商品培养液 完全培养基 也叫血清培养基; 分成细胞生长和细胞维持培养基 细胞生长培养基: 血清含量高, 10-20% 维持培养基: 血清含量低, 2-5% 完全培养基配制举例: 基础培养基 80％一95％ 血清 5％一20％ 碳酸氢钠 2.0 g/L 青霉素 50~100IU/ml培养液 链霉素 50~100ug/ml培养液 配制: RPMI-1640培养粉 1袋 碳酸氢钠 2.0 g 青、链霉素 各100IU/ml 加三蒸水至1000ml, 过滤除菌,调节pH值至7.2 ,加血清（终浓度10％）. （三）无血清培养基 血清中不仅存在促细胞生长因子，同对也存在细胞生长抑制因子或毒性因子，故在含血清培养基中培养的细胞所反映的生物学特性是细胞和复杂血清因子的综合反应。 在生长因子、蛋白质工程、基因表达调控等研究领域，迫切需要用无血清培养基培养细胞． 1975年，Sato首次成功地用无血清培养基培养了垂体细胞株，近20多年来已报道了几十种细胞系在无血清培养基中成功地生长和增殖。 无血清细胞培养基的使用保证了实验结果的准确性、可重复性和稳定性，减少了细胞污染，简化了提纯和鉴定各种细胞产物的程序。 向无清培养液中能促进细胞系生长的补加物都是独特的。