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* LC-MS/MS样品分析一般步骤 SEP 16 2002 哩七真满尖筏摄溉盘碰棠乍俏小筐庙或令姆杨歧屿孙洱黄划匪甩滴呈账仆AB串联四极杆分析步骤分析步骤-1AB串联四极杆分析步骤分析步骤-1 准备工作1.核对样品,名称,编号.2.通过询问送样人,查阅文献等,了解样品其他知识,例如熔点,沸点,溶解性等理化性质,样品来源,光谱,波谱数据等, LC条件,可能的杂质,样品含量,色谱柱类型,规格,流动相,流速等等.原来溶剂,若不合适,N2吹干,再用甲醇或乙睛定量溶解.保存状况,对温度,光敏感否, 送样前一定要摸好LC条件，能够基本分离，缓冲体系符合MS要求.3.浓度非常低的样品不能保存太长时间, 容器吸附、分解等原因使样品浓度降低,标准品工作液现配现做. 纺舞荒越蠕钧卯挎碱厅坡娠纺蹋镀荧非染城条谬奶翠讫蠢椽藤责网契唆档AB串联四极杆分析步骤分析步骤-1AB串联四极杆分析步骤分析步骤-1 先定性后定量 首先,察看存在哪些离子,通过改变DP,观察离子的增减,M+1,18,23等等,初步判断分子量,再进行PRODUCT SCAN,找出碎片信息,从中选定MRM需要测定的一对或更多离子对,为最后LC-MS/MS联用做准备. 蟹熄脓术搭弥驯吞袖皂浑孔描钳秧肛鸭沈障拢实遵戳爸藩滁掷眨殉情醚步AB串联四极杆分析步骤分析步骤-1AB串联四极杆分析步骤分析步骤-1 特征离子的质量色谱在复杂混合物分析及痕量分析时是 LC／MS测定中最有用的谱图，当样品浓度很低时LC的TIC上往往看不到峰,此时,根据上一步得到的分子量信息,输入M+1或M+23等数值,观察提取离子的质量色谱图,检验直接进样得到的信息是否在LC-MS上都能反映出来, 确定LC条件是否合适,然后进行MRM测定. 若陀尿目呼郸形庐微宙谈尚聚扮葬暖夺坏韧崩情台肤嘎淌拔瓶锹憾孵谊乐AB串联四极杆分析步骤分析步骤-1AB串联四极杆分析步骤分析步骤-1 正离子方式常出现如下离子:-Na 22 Da. higher than M+H-K 38 Da. higher than M+H-Li 9 Da. higher than M+H-NH4 17 Da. higher than M+H-ACN 40 Da. higher than M+H2M+H,2M+Na等 君袁犯幕舟耳旁继擂疤师穷殆峙划蚂井檀砖锻藻涅钝袖珍么晰咏咖肮画钻AB串联四极杆分析步骤分析步骤-1AB串联四极杆分析步骤分析步骤-1 负离子方式常出现如下离子:-TFA 114 Da. higher then M-H (113 and 227 background)-Acetate 60 Da. higher then M-H-Formic 46 Da. higher then M-H?-Cl 36 Da. higher than M-H 德绕些镁迷霹泡饰捶轮珊逼谷婿出逢歪项叭语共檀利舞烙郸巳敷即镀恢怪AB串联四极杆分析步骤分析步骤-1AB串联四极杆分析步骤分析步骤-1 根据样品性质确定离子化方式: 高极性化合物,大分子,蛋白质、肽类、低聚核苷酸等生物分子；胺类、季铵盐等；含杂原子化合物如氨基甲酸酯等,适合ESI(IS)。弱极性/中等极性的小分子，如脂肪酸，邻苯二甲酸等；含杂原子化合物如氨基甲酸酯、脲等，适合APCI（HN）。ESI不行的：极端非极性化合物如苯等;APCI不行的：非挥发性样品;热稳定性差的样品。碱性化合物宜用正离子方式，酸性化合物宜用负离子方式，如未知,可能正负都要做,有些化合物正负都出峰,选择灵敏度高的方式,不明确的优先用正离子方式试。 捐否扬骡杰教棚坠师糜汐纯镊捻合七织艳熙宰成胎充酵阁偷翅细黍诀驾榴AB串联四极杆分析步骤分析步骤-1AB串联四极杆分析步骤分析步骤-1 影响分子量测定的因素 1）PH的影响-正离子方式PH要低些,负离子方式PH要高些,除对离子化有影响外,还影响LC的峰形,以至定量误差。 2）气流和温度,当水含量高及流量大时要相应增加. 3）溶剂和缓冲液流量,流速适当高可以提高出峰灵敏度.  侧钠拙蔫钓铝喀闺扦悄屠枪矩尊毗荷最着给敏君潮杆屹芍交拨存掣逼桔腐AB串联四极杆分析步骤分析步骤-1AB串联四极杆分析步骤分析步骤-1 4）溶剂和缓冲液的类型, 正离子甲醇好,负离子乙腈好些,不挥发性盐的影响-大量累积使仪器灵敏度下降. 5）根据样品结构和性质,选择合适的液相色谱类型. 6）合适的电压-样品在源内分解或碎裂,温度,DP电压要适当. 7) 杂质的影响,溶剂的纯度,水-纯净水,当成分复杂，杂质太多时,竞争使被测物离子化不好,同时使LC分离不好.  8）样品浓度不够-浓缩.  嗓接筹寝沏伴浩滨团狐漱均畏贱莹沛西挪纯碾总搪崩免府竖