分子生物学实验操作方法与技巧.pptVIP

(四)背景知识问题 第一是对研究课题的背景知识了解不够。实验人员不知道实验要解决何种问题，怎样解决问题，不知道采用何种技术路线最有效地解决问题，这一现象是很严重的;第二是对具体的实验原理不懂，以至不能正确地分析实验现象，不能灵活地解决实验中遇到的问题。我们建议实验人员尽可能多地占有有关课题的背景资料，详细地阅读和理解有关的实验资料。 (五)安全问题 在分子生物学实验中，实验人员经常要接触到一些对人体有害的实验试剂，如溴化乙锭、丙烯酰胺、放射性同位素等，它们或者可能诱发癌症，或者对人神经系统产生累积毒害。因此，为了实验人员的人身安全，每一个人都应严格按照实验安全操作的有关要求进行操作。另一个问题是，实验室经常要使用煤气、水及电器，煤气泄漏导致爆炸或人员中毒死亡，实验室水龙头未关，下水道堵塞造成实验室水灾，实验室人员触电等时有发生，所以每一个实验人员在离开实验室时都应注意检查水、电、煤气，有关用电设备都应按操作说明使用，以防止不必要的人身意外伤亡。 分子生物学实验成功的关键 稳定的心理素质、正确而精准的实验技术、良好的实验习惯，是实验获得成功的关键。！ 实验室基本注意事项 一、新生进入实验室后必须做好的几件事情: 1、实验记录本，上面写清楚日期每天的实验内容，操作步骤、结果.如 果结果不好，应试着分析并写出原因以便以后参考。需要拍照的照 片，必须当时拍完，并编好文件日期妥善保存（格式一般是 *.tif）。如果犯了很不应该的错误,必须在实验记录本上注明,下次 不要再犯同样的错误. 2、有自己专用的实验样品盒，盒子放在冰箱的固定位置并且在盒子上面 用标签纸或记号笔标记上自己的名字以查找方便。盒子中的所有样品 必须都用记号笔标记好，最好在管子顶部和侧壁各写一个标记，以防 记号模糊。 3、实验仪器使用前必须仔细看懂操作方法，切忌不懂装懂。仪器用完应 登记。 4、看分子克隆等经典实验操作手册中实验的原理和关键步骤，提高自己 的理论水平。 5、跟师兄师姐做实验的时侯，应保持谦虚谨慎，不懂的地方及时请教。 6、认真学习防盗、防水、放电、防爆、防辐射、防污染的安全常识。 7、接触浓盐酸、浓硫酸、苯酚、EB实验时，必须小心谨慎，防止受伤。 新生做实验时最容易犯的错误1、离心机使用常见错误： （1）离心机使用不规范。 正确操作应该是：首先应该根据自己的实验需求选择合适的离心机和转子以及离心管，使用离心机时的工作转速不应该超过离心机、转子以及离心管的最大允许转速。离心前注意严格平衡样品。安装转子和转子盖要规范、准确。离心时要留人看守，发现离心机异常应立即关闭离心机。离心结束后要安放好转子，一般要倒扣转子（？）。 （2）3个样品、5个样品等的平衡问题。 （3）使用常温离心机时，必须盖上转头的顶盖。 （4）使用低温离心机时，用后应将转头拿下来，倒置放好。同时将离心机中的冷凝水擦干，将离心机的顶盖打开。 （5）使用低温离心机时，应提前预冷。预冷时应低速空转，以免损伤电机。离心机不用的时侯，必须及时关闭。制冷时切忌长时间打开顶盖，以保护电机。 2、使用移液器有哪些注意事项？ 垂直吸液、慢吸慢放；选择合适的量程范围，不能超过量程使用；选择与移液器匹配的枪头，安装枪头时不要用力太猛；移液器每日用完后，应旋到最大刻度。 移液器是精密仪器，调刻度时要慢慢调。 玻璃移液管的吸取要用吸耳球，而不能用口吸。 吸200微升液体，用100－200微升移液器还是200－1000微升移液器？吸250微升液体，如果要求体积精确度很高，用哪个移液器？ 3、灭菌锅使用注意事项 （1）定期清洗，一般1－2个月必须清洗一次。 否则灭菌锅底部排水处容易染菌。 （2）根据不同的灭菌条件选择不同的程序。如 固体、液体灭菌程序，并根据自己的特殊 要求设定合适的程序。如116度灭菌。 （3）必须等灭菌锅内温度降到90度以下才可以打开 灭菌锅。 （4）灭菌锅内灭菌物品不能塞得太满，以免影响蒸 汽流通，影响灭菌效果。 4、电泳实验容易犯的错误 （1）电泳结束后胶拿走，不关电泳仪。 （2）配胶时侯用水配，而没有用电泳缓冲液（TAE、TBE等）配。 （3）胶板、梳子到处放。胶板梳子上有EB等有毒物质，必须放在固定 地方。 （4）跑完电泳，胶长期留在胶板上，不闻不问；另外每次电泳过后， 不要的胶必须立刻丢弃，防止胶干在上面；胶板用过后需要清 洗，以防止污染。 （5）EB的污染。很多新生为了保护自己，电泳的时侯戴着手套，然后 开抽屉、开门或透射仪时，仍戴着手套。导致EB污染到很多地方。 （6）胶拍照的时侯必须在照像仪上贴一张保鲜膜，防止污染和弄花仪器面板。