蛋白质的重要性质讲解.ppt

聚丙烯酰胺的结构和特点 单体：丙烯酰胺，甲叉双丙烯酰胺 增速剂：TEMED（N,N,N’,N’-四甲基乙二胺）、3-二甲胺丙腈 引发剂：过硫酸铵、过硫酸钾、核黄素 特性：机械性能、弹性、透明度、粘着度、孔径大小 四.蛋白质的重要性质 (一)胶体性质 蛋白质的分子量1万-100万之间，其分子直径1-100nm之间，在胶体颗粒的范围。蛋白质的水溶液是一种比较稳定的亲水胶体，这是因为在蛋白质颗粒表面带有很多极性基团，如?NH3、?COO-、?OH-、?SH、?CONH2等和水有高度亲和性，当蛋白质与水相遇时，就很容易在蛋白质颗粒外面形成—层水膜。 所以蛋白质具有胶体性质，如布朗运动、光散射、电泳、不能透过半透膜及具有吸附能力等。利用蛋白质不能透过半透膜的性质，可用羊皮纸、火棉胶、玻璃纸等来分离纯化蛋白质，这个方法称透析（dialysis）。 四.蛋白质的重要性质 (一)胶体性质 (二)两性解离及等电点? 蛋白质同氨基酸一样也是两性电解质，即能和酸作用，也能和碱作用。蛋白质分子中可解离的基团除肽链末端的?-氨基和?-羧基外，主要还是多肽链中氨基酸残基上的侧链基团如?-氨基、?-羧基、?-羧基、咪唑基，胍基、酚基、疏基等。在一定的pH条件下，这些基团能解离为带电基团从而使蛋白质带电。 四.蛋白质的重要性质 蛋白质的等电点（pI）：当某蛋白质在一定的pH的溶液中，所带的正负电荷相等，它在电场中既不向阳极也不向阴极移动，此时溶液的pH值叫做该蛋白质的等电点。 酸性蛋白、碱性蛋白? 蛋白质的带电性质与溶液的pH有关。利用蛋白质的两性解离可以通过电泳分离纯化蛋白质。 四.蛋白质的重要性质 (二)两性解离及等电点? 蛋白质受到某些理化因素的影响，其空间结构发生改变，蛋白质的理化性质和生物学功能随之改变或丧失，但未导致蛋白质一级结构的改变，这种现象叫变性作用（denaturation）。 1.蛋白质变性的概念 2.蛋白质变性的因素 物理因素：加热、紫外线、超声波、高压等； 化学因素：强酸、强碱、脲、盐酸胍、去垢剂、重金属盐等； (三)蛋白质的变性 四.蛋白质的重要性质 生物活性丧失（酶）； 溶解度降低，粘度增大，扩散系数变小（蛋清）； 基团位置改变； 对蛋白酶敏感性增大。 3.蛋白质变性后的表现 四.蛋白质的重要性质 (三)蛋白质的变性 4.蛋白的复性 蛋白质的变性作用若不过于剧烈，则是一种可逆过程。高级结构松散了的变性蛋白质通常在除去变性因素后，可缓慢地重新自发折叠形成原来的构象，恢复原有的理化性质和生物活性，这种现象称为复性(renaturation)。 大多蛋白质变性后，很难复性。 四.蛋白质的重要性质 (三)蛋白质的变性 (四)蛋白质的沉淀 加入适当试剂使蛋白质分子处于等电点状态或失去水化层，蛋白质的胶体溶液就不稳定,并将产生沉淀。 能使蛋白质沉淀的试剂有： 1. 高浓度中性盐 （NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl（中和蛋白质的电荷） 这种加入盐使蛋白质沉淀析出的现象称为盐析，用于蛋白质分离制备。 2. 有机溶剂 丙酮、乙醇 (破坏蛋白质水膜) 四.蛋白质的重要性质 3.重金属盐 Hg2+、Ag+、Pb+ （与蛋白质中带负电基团形成不易溶解的盐,或改变蛋白质的空间结构） 4.生物碱试剂 苦味酸、目酸、钨酸等 （与蛋白质中带正电荷的基团生成不溶性盐） 四.蛋白质的重要性质 (四)蛋白质的沉淀 (五)蛋白质的颜色反应 1. 双缩脲反应 双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物。双缩脲在碱性溶液中能与硫酸铜反应产生红紫色络合物，此反应称双缩脲反应。蛋白质分子中含有许多和双缩脲结构相似的肽键，因此也能起双缩脲反应。通常可用此反应来定性鉴定蛋白质，也可根据反应产物的颜色深浅在540nm处进行蛋白质的定量测定。 四.蛋白质的重要性质 2. 酚试剂（Folin-酚试剂）反应 蛋白质分子中一般都含有酪氨酸，而酪氨酸中的酚基能将Folin-酚试剂中的磷钼酸及磷钨酸还原成蓝色化合物（即钼蓝和钨蓝的混合物）。这一反应常用来定量测定蛋白质含量。可根据反应产物的颜色深浅在540nm处进行蛋白质的定量测定. 四.蛋白质的重要性质 (五)蛋白质的颜色反应 3. 茚三酮反应 由于蛋白质多肽链两端有游离的?-NH2和?-COOH，所以蛋白质也可以和茚三酮发生反应。4. 考马斯亮兰 与蛋白质反应形成蓝色透明物质，在595nm下进行比色。 四.蛋白质的重要性质 (五)蛋白质的颜色反应 (六)蛋白质的的分离、纯化与鉴定 1.蛋白质分离、纯化的过程和一般